论文部分内容阅读
目的:程序性坏死是一种可调控的细胞死亡形式,以混合系列蛋白激酶样结构域蛋白(mixed lineage kinase like protein,MLKL)介导的膜结构破坏为特征。实验室前期研究表明,程序性坏死在缺血性脑中风中占重要地位,敲低程序性坏死相关蛋白RIP1K(receptor-interacting protein kinase 1)或使用其抑制剂 Nec-1(necrostatin-1)能够减少脑梗死体积、改善神经功能缺损、减少缺血皮层中神经元和星形胶质细胞的死亡。NSA(necrosulfonamide)是一种MLKL抑制剂,其在星形胶质细胞中的作用仍未有研究。本课题旨在探究NSA对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:在体内,建立大鼠短暂性大脑中动脉阻塞模型,缺血90 min后再灌注24h。于再灌注开始时侧脑室给予NSA,再灌注24 h后,通过TTC染色法检测脑梗死体积,通过Longa评分法、圆桶测试法进行神经症状评分;分离细胞质、细胞核、核膜并采用Western Blotting方法观察tMCAO造模后程序性坏死相关蛋白在胞内分布的变化。在体外,培养原代星形胶质细胞和人星形胶质细胞,建立氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)再复氧(reoxygenation,Re)模型,检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率以评估NSA对OGD/Re处理的星形胶质细胞和人星形胶质细胞损伤的保护作用;通过Western Blotting方法检测程序性坏死相关蛋白的表达情况。结果:NSA能够显著减小脑缺血/再灌注大鼠的梗死体积、改善神经行为功能缺损;且能够改善OGD/Re星形胶质细胞、人星形胶质细胞形态,降低乳酸脱氢酶漏出率。NSA减少OGD/Re星形胶质细胞程序性坏死相关蛋白MLKL、p-MLKL、RIP3K、p-RIP3K、RIP1K、p-RIP1K的表达。脑缺血/再灌注损伤后,细胞核及核膜蛋白中MLKL、p-MLKL、RIP3K、p-RIP3K 表达显著增加,但未检测到 RIP1K、p-RIP1K 有明显表达;NSA治疗能够显著降低细胞核及核膜蛋白中MLKL、p-MLKL、RIP3K、p-RIP3K的表达。结论:(1)NSA对大鼠短暂性大脑中动脉阻塞/再灌注损伤具有脑保护作用。(2)NSA能够保护氧糖剥夺/再复氧诱导的星形胶质细胞损伤;并抑制程序性坏死相关蛋白的表达。(3)脑缺血/再灌注损伤刺激MLKL和RIP3K入核;NSA能够显著抑制MLKL、RIP3K的结合及细胞核定位。