乙酰肝素(heparan sulfate，HS)又称硫酸肝素蛋白多糖(heparan sulfate proteoglycan，HSPG)是细胞外基质(extracellular matrix，ECM)和细胞表面的生物大分子，是基底膜(basement membrane，BM)的主要构成成分。乙酰肝素酶(heparanase)是一种葡萄糖苷酸内切酶，可水解乙酰肝素侧链与其核心蛋白相连的糖苷键，直接破坏ECM和BM，释放并激活血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)等生物活性分子。研究表明，乙酰肝素酶主要分布于胎盘、脾脏、淋巴结、胸腺、骨髓及活化的T、B淋巴细胞等免疫组织和细胞内，在胚胎生成期、创伤愈合、组织修复和炎症过程中起着非常重要的生理作用。在肿瘤形成和进展过程中，瘤细胞有效地“劫持”了上述正常细胞的功能，并可能发生类似于血管损伤反应时，从激活的血小板中释放出乙酰肝素酶，进而使炎细胞渗出并刺激血管内皮细胞分裂等分子机制来介导肿瘤的浸润、转移和肿瘤新生血管的生成。郑州大学2004年博士研究生论文乙酸肝不酶与食管鳞癌误润转移的关系及体内外抑制乙酸肝素酶蛋白、基因表达的实验研究 近年来，先后有乙酞肝素酶在乳腺癌、大肠癌、肝癌、前列腺癌和淋巴瘤等多种肿瘤组织中表达的报道，发现在发生浸润或转移的肿瘤组织以及高转移的癌细胞株中乙酞肝素酶均呈高表达;有转移癌的动物和黑色素瘤脑转移病人血清乙酞肝素酶含量、活性及表达亦增加;将乙酞肝素酶全长基因导入非浸润的淋巴瘤细胞系EbT并接种到裸鼠肝脏后，转移及致死能力明显增强。另外，有学者将乙酞肝素酶反义寡核昔酸及其抑制剂硫酸海带多糖等应用于抑制乳腺癌等恶性肿瘤浸润、转移的研究，证明硫酸海带多糖可明显抑制乙酞肝素酶的表达及肿瘤的浸润和转移。 食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，河南省是高发省份，其浸润、转移又是引起食管癌患者死亡的主要原因，因此，对食管癌浸润、转移机制的探讨已成为研究热点之一。虽然国内外有关乙酞肝素酶与肿瘤细胞浸润、转移关系的研究己有不少报道，但乙酞肝素酶与食管癌浸润、转移关系的研究仅有1篇相关文献，且只用了Rl飞PCR一种方法对癌组织及正常食管勃膜中乙酞肝素酶的表达进行了检测。为进一步探讨乙酞肝素酶表达与食管癌浸润、转移的关系;寻求早期检测食管癌浸润、转移的指标及寻找抑制食管癌浸润、转移的有效方法，本文采用免疫组织化学、原位杂交及RT-PCR等技术系统地检测了54例高发区食管鳞癌组织、22例癌旁不典型增生组织及54例正常粘膜中乙酞肝素酶的表达情况;采用PCR方法对54例食管鳞癌患者手术前、后外周血清中乙酞肝素酶基因进行了检测;采用RT-PCR方法检测了54例食管鳞癌患者手术前、后外周血淋巴细胞中乙酞肝素酶表达水平;采用免疫组织化学、完整细胞原位杂交等方法检测了食管癌EC97O6细胞中乙酞肝素酶的蛋白表达及mRNA表达，同时研究了塑纵左乞翌迁生胜塑鲤立以工一一一乙酞肝素酶抑制剂硫酸海带多糖和乙酞肝素酶反义寡核昔酸对Ec97o6细胞中乙酞肝素酶表达的影响;用乙酞肝素酶抑制剂硫酸海带多糖分组处理培养的EC97O6细胞及用乙酞肝素酶反义寡核昔酸分组转染培养的EC9706细胞，分组注入裸鼠皮下，在裸鼠体内构建食管癌移植瘤动物模型，采用免疫组织化学方法检测食管癌移植瘤组织中乙酞肝素酶及与乙酞肝素酶作用相关的u队和VEGF的蛋白表达情况。通过以上实验，试图阐明乙酞肝素酶表达在食管癌浸润、转移中的意义;乙酞肝素酶反义寡核营酸和乙酞肝素酶抑制剂对乙酞肝素酶的抑制作用。为进一步探讨食管癌浸润、转移机制及食管癌浸润、转移的阻断治疗提供理论基础。本实验分为以下四部分。 第一部分食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织及其正常薪膜中乙酞 肝素酶蛋白和基因表达的研究 方法 1.采用免疫组化SP技术对54例食管鳞癌组织、22例癌旁不典型增生组织和54例正常食管组织中乙酞肝素酶的蛋白表达进行检测。 2.采用原位杂交、RFPCR等技术对54例食管鳞癌组织、22例癌旁不典型增生组织和54例正常食管组织中乙酞肝素酶的基因表达进行检测。 3.统计学处理:所有数据均经SPSSIO.O软件进行统计分析。计数资料计算阳性率，计量资料用采用又士s表示;阳性率之间的比较采用扩检验(ehi一square)及Fisher确定概率计算法;两组均数的比较用t检验(t一test);两组以上均数的比较用方差分析(ANVOA);两变量之间的关系分析采用相关分析。显著性水准a二0.05。郑州大学2004年博士研究生论文乙酸肝幸酶与食管鳞瘩汉润转移的关系及体内外抑制乙酞肝素酶蛋白、葵因表达的实验研究 结果 1.转移组的癌组织、癌旁不典型增生组织及正常组织中乙酞肝素酶蛋白的阳性表达率分别为:100.00%(21/21)、80.00%(8/10)和0.00%(0/21);无转移组的癌组织、癌旁不典型增生组织及正常组织中则分别为:36.36% (12/33)、33.33%(4/12)和0.00%(o/33)。两组间癌组织、癌旁不典型增生组织两两相比，差异均有显著性(癌组织P<0.01;不典型增生P<0