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本文从新鲜大熊猫粪便和实验室保存的沼气发酵富集物中筛选得到4株厌氧纤维素分解菌B5、C3、D3-2、D4-1,利用这4株菌预处理秸秆,然后将预处理后的秸秆用本实验室保存的厌氧产氢菌来发酵进行生物产氢。同时还比较研究了:①用1% H2SO4、25% NH3.H2O和12% NaOH对秸秆进行化学预处理;②用厌氧纤维素分解菌对秸秆进行生物预处理;③化学与生物组合预处理对秸秆发酵生物产氢的影响。实验结果表明:12% NaOH和生物组合预处理后的秸秆发酵产氢效果最好,其产氢量为21.04 mL g-1,是未经预处理秸秆的75倍;最高氢气浓度为57.3%,是未经预处理秸秆的96倍;其产氢的最适pH为4.5~6.0,最佳底物浓度为45~559 L-1;其发酵过程中的挥发性脂肪酸(VFAs)以乙酸和丁酸为主。
本实验筛选到的4株厌氧纤维素分解菌株中,B5和D4-1在降解纤维素的同时还具有直接以纤维素为底物产氢的功能,因此本文分别对菌株B5和D4-1以及二者的组合菌株B5+D4-1直接利用秸秆为基质发酵生物产氢做了初步探索研究,结果发现:组合菌株发酵产氢的效果以及对秸秆纤维素和半纤维素的降解率要比单菌株好。菌株B5+D4-1发酵,秸秆的产氢量为11.4 mL g-1,分别是B5和D4-1单菌株的1.6倍和3.1倍;组合菌株B5+D4-1发酵的最大氢气浓度为31.6%,分别是B5和D4-1单菌株的1.3倍和2.4倍。在发酵过程中,组合菌株B5+D4-1对秸秆纤维素和半纤维素的最高降解率分别为35.0%和11.8%,分别是菌株B5的1.2倍和1.1倍,是菌株D4-1的1.5倍和1.3倍。菌株B5,D4-1以及组合菌株B5+D4-1发酵过程产生的挥发性脂肪酸(VFAs)均以乙酸为主。菌株B5单独发酵过程中只检测到乙酸和丁酸,菌株D4-1单独发酵以及组合菌株B5+D4-1发酵过程检测到有乙醇、乙酸和丁酸。