前言 骨性关节炎(Osteoarthritis，OA)是一种严重危害中老年人身体健康的慢性退行性关节病。据有关资料统计在50岁以上的人口中，其发病率仅次于心脏病而居第二位。从分子水平阐明骨关节病的发病机理是当今医学领域中研究的重要课题。OA包含急、慢性炎症，免疫反应及生化反应等一系列病理过程，是一个复杂的多因素的临床改变，但软骨细胞外基质的合成和降解异常在整个疾病的发生、发展过程中至关重要。纤维连接蛋白(fibronectin，FN)是存在于血浆和多种组织中一种具有高度粘附活性的糖蛋白，是创伤修复过程中一种重要的细胞外基质成分。它的功能多样，能加速血液凝固，对单核细胞和中性粒细胞具有化学趋化作用，能吸引成纤维细胞和软骨细胞向损伤区域移动，参与细胞的信号传导与活化，细胞的生长及分化，创伤修复等一系列重要生理和病理过程。临床上应用FN能促进软骨细胞在微载体表面的贴附与增殖及慢性角膜溃疡和静脉溃疡的上皮化。FN在创伤时出现较早，积极参与创伤修复的全过程，具有多种重要的修复作用。本文应用定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)方法检测膝关节骨关节炎的软骨组织和正常膝关节软骨组织中FN mRNA的表达水平情况，探讨FN mRNA的表达水平的变化与骨关节炎的关系，为进一步研究骨关节炎难愈合发生的分子生物学机制提供理论依据。 材料和方法 本实验取wistar鼠16只(雌雄各半)，随机分成两组，每组8只。一组以关节制动的方法，采用石膏管型固定右膝关节，人工制作骨关节炎动物模型作为实验组，另一组作为对照组。饲养6周后实验组解除制动，两周后 16只 wistaf鼠处死，切取其右膝关节软骨组织，采用定量聚合酶链式反应口CR）方法检测纤维连接蛋白mRNA表达水平的变化，所得数据应用SPSS 10．0软件包进行均数比较中的成组t检验分析。 结 果 实验结果表明：在wistar鼠的正常膝关节的软骨组织中与人工制造膝关节骨关节炎的软骨组织中均存在纤维连接蛋白InRNA表达，但其表达水平在骨关节炎的软骨组织中显著低于正常膝关节的软骨组织，表达量约为正常膝关节软骨组织的 37％。 讨 论 OA是中老年人群中最常见的疾病，致残率高，它不仅给患者带来极大的痛苦，严重影响病人的生活质量，同时也是骨科临床尚未攻克的一大难题，其治疗手段由于对导致OA发生的确切病因尚缺乏真正的了解，因此使治疗OA的手段也多停留在以治标为主的水平上。因此有关OA发生的分子生物学机制研究将对预防和治疗此类疾病起积极作用。 创伤修复由参与修复的细胞与细胞外基质之间的相互作用共同完成。FN是细胞外基质的重要成分，可通过介导研间或细胞间粘附来参与修复。此外，它通过影响组织修复细胞的趋化、调理和促进炎性细胞的吞噬、促进软骨细胞的移行等作用，参与一系列的修复过程。焦岩涛等应用FN能明显促进软骨细胞在微载体表面的粘附与增殖。美国XieDL的研究指出在OA发生时基质金属蛋白酶（MMPs）表达增高，FN含量下降，FN的分解片段（FN－fs）明显增多，加重关节软骨的损伤。我们认为，在OA发生时软骨组织中FN含量的降低不仅来自其酶解作用的增加，另一个可能的 ·2· 重要原因源于其自身生成的减少，进而影响软骨细胞及其它的细 胞外基质的作用。本实验的结果支持了这一观点，即FN转录水 平的下调是OA软骨组织中的FN含量减少的原因之一，这可能是 造成OA的发生和难愈合的原因之一。 Nowhem杂交是检测基因转录表达水平的经典方法，存在难 度大、定量困难，操作复杂，且难以检出表达水平低的基因等缺点。 本实验采用定量PCR方法具有灵敏度高、专一性好、简便快速等 特点。为了消除不同样本、不同实验批次及测量的系统误差，在实 验中我们选用在大多数细胞中均为高表达的p－achn作为内对 照，在同一反应管中同时扩增FN和p－achn，并以两者的灰度比 值来衡量FN的表达水平，避免了许多因素的干扰，使测定的结果 更加准确、可靠。 结 论 骨关节炎的软骨组织中纤维连接蛋白mRNA表达水平降低， 这种转录水平的下调可能是骨关节炎的发生和难愈合的原因之一。