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乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种世界性疾病,发展中国家发病率较高,据统计,全世界约有2.8亿人慢性感染乙型肝炎病毒,在我国就约占了1亿。每年我国约有2千万乙型肝炎病毒慢性感染者发病,约有30万人死于乙肝病毒相关的肝衰竭、肝硬化以及肝癌。国家每年要花大量的医疗经费用于乙肝患者的治疗,乙肝问题已成为我国急需解决的公共卫生问题[1]。乙肝慢加急肝衰竭(Acute on chronic liver failure,ACLF)是在慢性乙型肝炎的基础上,由于多种因素作用下,肝组织破坏急性加重,大量肝组织细胞坏死,导致肝功能衰竭[2],同时并发肝性脑病、肝肾综合征、消化道出血、感染等严重并发症,病死率极高。目前研究表明慢加急肝衰竭发病机制可能与HBV病毒复制、宿主免疫反应以及感染等多种因素有关,但确切机制尚待进一步研究。近年来,临床研究提示机体免疫功能失调可能是乙肝慢加急肝衰竭肝组织严重损伤的主要机制之一[3]。调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)是一类具有免疫调节功能的T细细胞群,其特征性标记物为CD4+CD25+FoxP3+,具有免疫低反应性和免疫抑制性两大功能特征[4]。研究已证实Treg的数量及功能改变与很多疾病如自身免疫性疾病、肿瘤及感染性疾病等密切相关[5-12]。最近研究发现CD39+FoxP3+Treg细胞可能是Treg中发挥免疫调节功能的主要细胞群。CD39是细胞外三磷酸腺苷(ATP)水解酶家族成员之一,其作用在于水解细胞外的三磷酸腺苷/二磷酸腺苷(ATP/ADP)。ATP是细胞损伤的指示剂,细胞内的ATP浓度很高,细胞损伤后,细胞内大量的ATP释放到细胞外,ATP被嘌呤P2受体识别后诱发主要的炎症前反应。CD39通过灭活ATP,抑制由ATP诱发的炎症反应[13]。目前研究发现CD39主要表达于FxoP3+ Treg细胞膜外,并且其在Treg细胞的免疫调节功能中发挥非常重要的作用。国外研究证实,CD39+FoxP3+Treg细胞免疫抑制功能显著强于CD39-FoxP3+Treg细胞,并且和多种疾病的发病和进展密切相关。现已证实,不同疾病进程的多发性硬化(multiple sclerosis,MS)患者外周血中Treg细胞数量与健康人差异不大,但两者间CD39在Treg细胞胞外的表达比例存在显著差异,MS复发的患者外周血中FoxP3+Treg细胞CD39的表达比例明显低于处于稳定状态的MS患者以及健康人[14]。HBV慢性感染的特点是其病毒特异性免疫反应微弱,目前认为乙型肝炎的慢性活动状态与异常的免疫耐受有关,但免疫耐受的机制目前尚不清楚。Treg细胞可以抑制效应T细胞的功能,近年的研究发现Treg细胞在抗HBV特异性免疫反应损伤中发挥着重要的作用。但CD39+Treg细胞是否参与了乙肝慢加急肝衰竭的发病过程目前在国内、外还未见报道。为了进一步认识CD39+Treg细胞与乙肝慢加急肝衰竭的发病关系,我们首先对健康人外周血CD39+Treg细胞的表型及功能特点进行分析,比较了乙肝慢加急肝衰竭患者与健康人外周血CD39+Treg细胞的变化情况,对比乙肝慢加急肝衰竭存活组和死亡组外周血CD39+Treg细胞占CD4+T细胞比例的差异,通过功能试验验证了CD39+Treg细胞的抑制功能。本研究具体的研究内容及结果有以下几个方面。一健康人外周血CD39+FoxP3+Treg细胞的表型鉴定为了探讨CD39+Treg细胞与乙肝慢加急肝衰竭的关系,我们首先检测了健康人外周血的Treg细胞表型,FACS结果显示以CD39作为标志物,可以将FoxP3+ Treg细胞分成CD39+FoxP3+Treg和CD39 - FoxP3+Treg两群细胞, CTLA-4、HLA-DR、CD45RO、Ki-67等表面标记物在CD39+FoxP3+Treg细胞的表达明显高于CD39-FoxP3+Treg细胞。上述结果为我们下一步的功能试验奠定了基础。二健康人外周血CD39+FoxP3+Treg细胞的功能分析Treg细胞的鉴定除了表型外,更重要的是体内或体外环境下是否发挥抑制功能。本部分分别对CD39+FoxP3+Treg和CD39-Fxop3+Treg细胞抑制PBMC増殖和IFN-γ分泌的能力进行了检测。结果显示表达CD39的FoxP3+Treg细胞抑制细胞增殖功能明显强于不表达CD39的FoxP3+Treg细胞,且明显抑制外周血单个核细胞IFN-γ的分泌。三健康人和乙肝慢加急肝衰竭患者外周血中CD39+FoxP3+Treg细胞的变化比较为了明确CD39+FoxP3+Treg细胞与乙肝慢加急肝衰竭发病是否密切相关,我们比较健康人和乙肝慢加急肝衰竭患者外周血中CD39+FoxP3+Treg细胞比例的情况,对比乙肝慢加急肝衰竭存活组和死亡组外周血CD39+Treg细胞占CD4+T细胞比例的差异。结果显示,乙肝慢加急肝衰竭患者外周血中CD39+FoxP3+Treg细胞比例明显高于健康人,乙肝慢加急肝衰竭存活组外周血CD39+FoxP3+Treg细胞占CD4+T细胞比例明显高于死亡组。本研究比较了CD39+FoxP3+Treg细胞在健康人和乙肝慢加急肝衰竭患者中的变化,并通过功能实验验证其抑制功能。为进一步研究乙肝慢加急肝衰竭的发病机制提供了新的思路。