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干扰素(IFNs)是病原微生物入侵,诱导机体产生的一类具有抗病毒活性的细胞因子,属机体Ⅱ类细胞因子,在先天免疫应答中起着非常重要的作用。目前,根据氨基酸序列、结构特点以及受体特性等,将干扰素分为Ⅲ类：Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型干扰素。Ⅲ型干扰素(IFN-λs)为2003年发现的一类新型干扰素,其抗病毒作用并不是直接杀伤病毒,而是通过与其特异受体IFNLR1和IL-10R2构成的异源二聚体复合物结合,激活与Ⅰ型干扰素相似的JAK-STAT信号通路,诱导一系列具有抗病毒作用的干扰素刺激基因(ISGs)。本研究首次克隆获得鹅Ⅲ型干扰素(goIFNL)及其特异受体(goIFNLR1)的cDNA序列,并进行了相关生物信息学分析。goIFNL的cDNA序列获得823 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码189aa; goIFNLR1序列获得1952 bp,包含-个完整的开放阅读框,编码512 aa。通过NJ法进化树分析,显示这两个基因属于鸟类这一分支,与禽类亲缘关系更为接近。应用实时荧光定量PCR方法对goIFNL和goIFNLR1的组织分布情况进行探索,结果显示goIFNL主要分布在呼吸道组织肺脏(LU)、气管(TR);胃肠道组织小肠(SI)、肌胃(GI)；皮肤(SK);胰腺(P)及全血(Blood)等上皮细胞丰盛的组织中,其特异受体goIFNLR1具有相似的组织分布情况。为了解goIFNL的免疫学特性,选用四种TLR的激动剂及三种禽类相关病毒分别刺激鹅外周血单.核细胞建立体外感染细胞模型,结果显示在TLR3的激动剂Poly (I:C)以及TLR9的激动剂ODN2006的刺激下,goIFNL mRNA的转录水平得到显著性的提升。在TLR4的激动剂LPS及TLR7的激动剂R848的刺激下,goIFNL mRNA的转录水平相较对照组无显著性差异。goIFNLR1 mRNA的转录水平在这四种TLR的激动剂的刺激下相较对照组均无显著性差异。紧接着,我们又探究了鹅重要传染病的病毒病原对目标分子的影响：在小鹅瘟(GPV)病毒的感染下,goIFNL mRNA的转录水平具有显著性的升高;在低致病性禽流感病母(H9N2 AIV)及鸭坦布苏病毒(DTMUV)的感染下,goIFNL mRNA的转录水平相较对照组无显著性差异,而goIFNLR1 mRNA的转录水平在这三种病毒的刺激下均无显著性差异。同时,选用这三种禽类病毒人工感染雏鹅建立体内动物模型,经qRT-PCR检测goIFNL及goIFNLR1 mRNA的转录水平,结果显示在H9N2AIV的感染下,goIFNL的表达量相较对照组在肺脏组织(LU)中有近20倍的提升,在胰腺组织(P)中有近40倍的提升。而在其他两种病毒的感染下,goIFNL及goIFNLR1 mRNA的转录水平相较对照组无显著性差异。以上结果表明goIFNL在鹅的抗病毒固有免疫中扮演着一定的角色。为进一步了解其生物学功能,选择对goIFNL进行原核和真核表达,分别构建pET-32a-goIFNL原核表达载体及pcDNA3.1-goIFNL真核表达载体。构建的原核表达质粒以IPTG终浓度0.8mM诱导3h的条件在大肠杆菌BL21 (DE3)中被成功诱导表达,表达的融合蛋白以包涵体形式存在。利用Ni-NTA亲和层析纯化重组goIFNL融合蛋白,并以此为免疫原制备鼠抗goIFNL多克隆抗体。经Western-Blot验证,真核表达重组质粒pcDNA3.1-goIFNL能在BHK21细胞中表达goIFNL蛋白,这为goIFNL抗病毒免疫学功能的研究奠定了基础。综上,本研究成功克隆了goIFNL及goIFNLRl基因,并对其在鹅的组织分布及其免疫学特性进行了初步研究,goIFNL的原核表达及真核表达为后续进行生物学活性的研究奠定了基础。