D-甘露糖提取纯化工艺研究

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糖类化合物亦称碳水化合物,是自然界存在最多、分布最广的一类重要的有机化合物。糖类化合物是一切生物体维持生命活动所需能量的主要来源。它不仅是营养物质,而且还具有肝素的抗凝血作用、血糖的免疫活性等生理功能。甘露糖是一种具有重要功能的六碳糖,存在于植物的细胞中,在医药工业、食品工业、饲料工业和生命科学等的研究中具有重要的作用。本文综述了近几年来D-甘露糖的性能、用途和提取方法,在文献的基础上,设计了一条新的提取D-甘露糖的工艺路线,以棕树籽为原料,经过酸水解、碱中和、酶催化反应、硅胶柱洗脱、离子柱除盐、结晶重结晶等步骤,得到目标产物。最终收率为原料重量的48.4%。具体的路线如下:在原料的筛选中,经过对原料来源难易程度的比较,选择了以棕树籽为原料,对产品水解后的反应液加入β-甘露聚糖酶再水解,使反应液D-甘露糖浓度大幅度提高.并研究了影响反应水解的重要因素,优化的适宜工艺为:原料经过粉碎过60目筛,5%硫酸为酸水解剂,原料与水的重量体积比1∶7,油浴设定温度为100℃,反应时间50min,Ba(OH)2中和成中性,过滤,D-甘露糖浓度为0.256g·mL-1,滤液加入β-甘露聚糖酶再水解,用量为液体体积的1%,再水解时间为50min,再水解温度为60℃。D-甘露糖浓度达到0.639g·mL-1。在分离的工序中,以硅胶和浓缩液混合加热搅拌使其成为粉末后过柱,可以使样品上柱操作容易,不会粘稠而堵塞硅胶柱,收率也有所提高。较适宜的工艺条件是:以酸水解、β-甘露聚糖酶再水解后的提取液为原料,浓缩成原体积的1/3后加入1∶1重量的硅胶粉,加热搅拌蒸发掉剩余水分使成粉末状,上硅胶层析柱,过柱温度为30℃,每次上柱60g粉末样品,正丁醇:乙酸乙酯:异丙醇:水=2∶1∶0.7∶0.3为洗脱液,控制流速范围在2~8mL·min-1,收集220mL流出液。D-甘露糖的过柱收率为96.9%。在除盐的工序中,从001×1、001×4、001×7、201×4、201×7、D290、D151、D113等树脂经摇瓶实验,筛选出了001×4、201×7两种树脂,其脱盐效果最好。较适宜的工艺为:以过柱后的收集液为原料,经浓缩成原体积的2/3后过离子交换树脂除盐,确定了先阳离子交换树脂柱后阴离子树脂交换柱的洗脱顺序,收集液从原来的导电率1950us·cm-1降到125.3us·cm-1,盐度从3.2ppt降到0.2ppt,除盐效果比较满意。除盐后本工序收率为90.1%。在结晶的工序中,通过三种不同的结晶方式比较,确定了产品的结晶方法,具体的工艺如下:以除盐后的收集液为原料,将浓缩液置于一锥形瓶内,量取其5倍体积的95%乙醇加入其中,放入水浴摇床中在75℃下以200r·min-1的速率震荡3小时。取出后室温静置24小时,本工序结晶收率为86.7%。本文实现了整个过程,并对最终提取物的结构进行了检测确认,研究了影响各步反应及提取的关键因素,为生产过程提供了重要的基础数据。
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