鲍曼不动杆菌是医院感染重要的条件致病菌，多重耐药的鲍曼不动杆菌引起的感染在医院中的大规模流行时有报导。2006-2008年本院临床微生物监测显示的多重耐药鲍曼不动杆菌耐药谱十分相似。为了进一步明确2006-2008年我院出现的多重耐药菌株的同源性及是否存在克隆传播，本研究采用微生物学和分子生物学技术，应用肠杆菌科基因问重复序列引物PCR(Enterobacterial repetitive intergenic consensussequence-based PCR，ERIC-PCR)技术对从患者体内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌进行分子流行病学调查，并探讨鲍曼不动杆菌的胞膜主动外排泵机制，分析其基因表型及耐药性传播机制，阐明其分子流行病学特征与主动外排泵耐药系统的关系；为指导临床合理使用抗生素，监测和控制耐药菌株的播散提供实验依据。本研究分为三个部分：　　 ㈠多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排表型的检测及其主动外排泵编码基因分析。　　 方法：标本为2006-2008年来源于我院患者体内分离后留有菌种的耐药鲍曼不动杆菌共23株，其中2006年8株，2007年3株，2008年12株；1株为质控标准参考菌株ATCC27853。菌种鉴定采用Vitek32系统。采用琼脂二倍法测定外排泵抑制剂(奥美拉唑、利血平和氰氯苯腙)对抗菌药物对抗多重耐药鲍曼不动杆菌活性的影响，以加入泵抑制剂后抗生素MIC下降≥4倍为阳性标准，提示存在主动外排机制，并应用PCR和DNA测序技术进一步了解主动外排泵的编码基因。　　 结果：外排泵抑制剂奥美拉唑、利血平、氰氯苯腙(CCCP)三者均对鲍曼不动杆菌外排泵有抑制作用，但抑制强度不一，以CCCP作用最强，而奥美拉唑作用最弱。加入CCCP筛选出鲍曼不动杆菌外排泵的阳性株为16株，阳性率为69.6％，而利血平和奥美拉唑分别筛选出4、2株，阳性率仅为17.4％、8.7％。以AdeB为引物经PCR技术扩增主动外排泵编码基因，PCR检测结果为16株阳性，经测序分析后，证实为AdeB主动外排泵编码基因，其中11株同样为CCCP筛选出的阳性菌株。　　 结论：从2006-2008年本院住院患者体内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药机制存在主动外排系统的参与，其基因型主要为AdeB型。CCCP、利血平和奥美拉唑均对主动外排泵有抑制作用，但CCCP更适合作为筛选鲍曼不动杆菌主动外排泵的抑制剂。　　 ㈡多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排泵表达量的检测。　　 方法：标本为第一部分所调查的PCR检测主动外排泵编码基因阳性的菌株，共16株。运用RT-PCR技术检测主动外排泵adeB及adeRS基因的表达量。　　 结果：PCR检测阳性的菌株中有14株RT-PCR检测结果为阳性，即有adeRS、adeB的转录表达，呈现为a、b、d、g和i共5种耐药模式；编号2535号及编号2631号菌株PCR检测结果为阳性，RT-PCR检测结果为阴性，但CCCP检测结果为2535号菌株为阴性，2631号CCCP检测结果为阳性；编号519、2884、8865和13140号菌株PCR和RT-PCR检测结果均为阳性，但CCCP检测结果均为阴性。　　 结论：本次研究所调查的多重耐药鲍曼不动杆菌的主动外排泵表达程度不尽相同，说明CCCP作为筛选鲍曼不动杆菌主动外排泵的抑制剂时不一定能全部反应细菌外排泵情况。　　 ㈢ERIC2-PCR分析多重耐药鲍曼不动杆菌的同源性。　　 方法：标本为第一部分所调查2006-2008年来源于我院患者体内分离后留有菌种的耐药鲍曼不动杆菌共23株，菌种鉴定采用Vitek32系统。分子流行病学分型采用ERIC-PCR分型。基因组指纹图谱结果用BioNumerics4.6I软件分析，凡相似度的值大于80％者被归为一克隆株。　　 结果：23株鲍曼不动杆菌可划分为7种基因型，分别描述为A、B、…F、G型，以A型最多，有12株，占52.2％，且可分为2个亚型A1和A2，其中A1亚型有5株，主要分布在内科系统，标本来源以痰为主，在06、08年检出；A2亚型有7株，主要分布在外科系统及重症监护室，标本来源除了有痰标本，还包括静脉导管和分泌物来源，在06、08年检出，以2008年较多；B型有6株，占26.1％，主要分布在内、外科系统普通病区，其中呼吸科占3株，标本来源以痰为主，在06、07和08年检出。　　 结论：本次研究所调查的多重耐药鲍曼不动杆菌来自多个病区，提示存在院内克隆传播。