目的：RNA干扰（RNAi）是一种由双链RNA所引发的序列特异性的基因沉默现象。外源性的（siRNA或dsRNA）和内源性的（miRNA或endo-siRNA）小RNA分子与细胞内的Argonaute蛋白及相关因子结合,形成RNA诱导的沉默复合体（RISC）,进而完成对特异性靶mRNA的剪切、降解或翻译抑制。人类Argonaute2（Ago2）蛋白作为RISC的核心成分,在RNAi过程中发挥重要作用。本研究在前期利用酵母双杂交系统进行筛选的基础上,将进一步确定PSMC3与Ago2相互作用的结构区域,并探究这种相互作用对Ago2蛋白表达水平的调控作用,以及这种调控机制对RNAi途径的影响。方法：利用酵母双杂交和免疫共沉淀方法在细胞内确定与Ago2相互作用的PSMC3的结构区域。采用蛋白质印迹技术研究了PSMC3表达改变对Ago2蛋白水平的影响。通过放线菌酮干扰新蛋白质的合成后,检测了Ago2蛋白的半衰期,并用免疫沉淀技术检测了Ago2的泛素化水平。此外,通过使用26s蛋白酶体抑制剂MG132研究了泛素—26S蛋白酶体途径在沉默PSMC3介导的Ago2蛋白降解中的作用。同时,利用荧光报告载体系统,在细胞内沉默内源性PSMC3或过表达外源性PSMC3,研究PSMC3表达水平改变对siRNA和miRNA介导的靶基因特异性剪切与翻译抑制的影响。结果：1.利用酵母双杂交和免疫共沉淀技术确定PSMC3通过其N末端的卷曲螺旋结构域与人类Ago2蛋白直接相互作用。2.过表达PSMC3可以增强Ago2的表达,沉默PSMC3可以降低Ago2的表达。3.沉默内源性PSMC3可以通过增加Ago2的泛素化水平,进而促进了Ago2蛋白的降解。4.用MG132抑制26S蛋白酶体,可以恢复Ago2的蛋白水平。5.采用荧光报告载体系统证实沉默内源性PSMC3抑制了siRNA和miRNA介导的靶基因mRNA剪切。结论：PSMC3通过其N末端的卷曲螺旋结构域与人类Ago2蛋白直接相互作用,这种相互作用在维持Ago2的稳定性方面起着一定作用。在细胞内沉默PSMC3后,Ago2的泛素化水平增加,泛素化的Ago2蛋白通过26S蛋白酶体降解,最终导致有活性的功能分子减少,进而引起了细胞内RNAi功能受抑制。由于Ago2是RISC的核心成分,发现一种新的与Ago2蛋白相互作用的细胞内分子—PSMC3,并确定它在维持Ago2蛋白稳定性中的作用,这将有利于我们进一步理解RNAi途径中的关键分子及其复杂的调控机制。