沼气工程是农村生物质能源高效利用的主要方式,经过厌氧发酵产生沼气后残留的沼液富含植物生长发育所需的多种营养元素和刺激作物生长的活性抗性物质,是一种速缓效兼备的液态有机肥,沼液合理农用可促进作物生长、改善土壤环境质量、降低农业生产成本,同时缓解沼液后续处理压力。本研究以四川金利有限公司生猪黑石养殖场厌氧发酵完全的沼液为灌溉肥,在四川省邛崃市固驿镇黑石村黄壤性水稻土上开展连年三年“水稻一油菜”轮作田间试验。试验设置12个处理(1个清水对照,1个常规施肥对照,10个不同施用量的纯沼液处理),分别采集连续三年试验后0-60cm土壤,研究沼液连年施用对“稻-油”轮作土壤微生物学特性的影响。试验主要研究结果如下。(1)施肥可有效增加0-60cm土壤微生物数量,但不影响其垂直空间分布状况,随土壤深度增加微生物数量逐渐减少,沼液替代化肥可为土壤微生物生长提供更丰富的养分；随沼液施用量增加,不同深度土壤微生物数量变化各异,细菌在0-60 cm土壤中活性均不断增强；真菌数量在0-40cm表现为先增加后减少且均于沼液施用总量为495.31t/hm2时达最大值,40-60cm土壤中真菌数量无明显变化；放线菌数量在0-20cm土壤呈先增加后减少的趋势并于沼液连年施用总量为626.10 t/hm2时达峰值,20-40 cm数量不断增加,40-60cm数量不断减少。(2)分析土壤DGGE图谱得到,沼液连年施用不利于丰富土壤细菌群落多样性,当沼液施用总量控制在339.31-396.81t/hm2范围内细菌群落多样性增加,细菌种群功能丰富、信息复杂、种群稳定,过高或过低施用沼液都会显著降低细菌群落多样性；通过UPGMA分析,长期连年沼液施用后土壤细菌遗传相似性降低,细菌种群结构变化越来越大。(3)沼液连年施用可有效激活0-20cm土壤酶活性,加快耕层土壤碳、氮、磷循环速率,改善土壤质量。随沼液施用量增加,土壤脲酶和蔗糖酶活性呈先降低后升高再降低的变化趋势,并于沼液施用总量为495.31t/hm2时同时达最大值；过氧化氢酶和磷酸酶活性呈先升高后降低趋势,分别于546.32t/hm2和339.31t/hm2沼液施用总量时达到峰值。(4)施肥方式对不同深度土壤酶活性影响程度不同,导致各种土壤酶活性空间分布发生变化,化肥长期施用改变土壤过氧化氢酶活性分布,随土壤深度增加而增强；沼液连年施用改变脲酶和蔗糖酶活性空间分布状况,其中较高沼液施用量处理(施用总量高于546.32t/hm2)土壤脲酶活性空间分布随土壤深度增加先降低后升高,且40-60cm脲酶活性高于0-20cm,土壤蔗糖酶活性与土壤深度成反比。(5)沼液处理0-20cm土壤微生物数量与酶活性水平提高,但细菌/真菌(B/F)比值降低,预示长期施用沼液可能存在土壤向低肥高害的“真菌型”转化的风险。综上所述,三年连年施用沼液总量控制在396.81t/hm2 (BS4处理)左右土壤微域生态环境不受破坏,土壤微生物数量增加、土壤酶活性增强、细菌种群稳定性好。