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目的： 细胞表面糖基化的改变是肿瘤的特征之一，糖链的改变影响着糖蛋白的生物功能，从而导致细胞与细胞、细胞与基质之间相互作用的改变，进而影响肿瘤细胞的粘附、侵袭和转移。岩藻糖基转移酶(FUT8)是形成核心岩藻糖修饰的糖基转移酶，在乳腺癌中有异常的表达，但其具体的作用机制尚不清楚。本课题采用RNA干扰技术，将靶向针对FUT8的shRNA质粒转染进乳腺癌细胞，观察FUT8干扰对乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响，探讨FUT8在乳腺癌发生发展中的作用机制，为乳腺癌分子靶向治疗和诊断提供实验依据和理论基础。 方法： 1、聚合酶链式反应检测正常乳腺上皮细胞株MCF-10A及乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231中9种岩藻糖基转移酶亚型mRNA的表达，筛选在乳腺癌细胞中高表达的岩藻糖基转移酶亚型。 2、利用转染试剂Lip2000将构建好的人FUT8基因重组真核质粒pGPU/GFP/Neo-FUT8及对照载体转入人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231中，利用G418筛选阳性克隆细胞。 3、Quantitative Real-Time PCR及Western Blot方法检测稳定转染细胞株中FUT8基因和蛋白的表达鉴定RNA干扰的效果。 4、划痕实验和Transwell实验检测FUT8干扰对细胞迁移能力的影响。 5、Quantitative Real-Time PCR及Western Blot方法检测粘附分子E-cadherin、β-catenin和基质金属蛋白酶MMP2、MMP9基因和蛋白水平表达的变化。 6、激光共聚焦技术检测β-catenin在细胞核、细胞膜分布的变化。 7、CCK8检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡，QuantitativeReal-Time PCR检测细胞抗凋亡蛋白Bcl-2及细胞周期蛋白cyclinD1基因水平的变化;Western Blot检测细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达的改变，观察FUT8低表达对乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231凋亡的影响。 结果： 1、Quantitative Real-Time PCR和Western Blot结果表明FUT8-shRNA转染组，FUT8基因和蛋白的表达水平均降低。 2、划痕实验和Transwell实验结果显示FUT8低表达细胞株迁移能力降低。 3、E-cadherin在MCF-7中和MDA-MB-231细胞中的表达量均显著升高，而β-catenin表达量则变化不大，但E-cadherin/β-catenin表达总量在两种稳定转染细胞中是升高的;MMP2和MMP9在两种细胞株中表达量都降低;显示FUT8低表达后细胞株粘附能力降低。 4、免疫荧光结果显示FUT8低表达MDA-MB-231细胞株中，β-catenin蛋白表达量没有明显变化，但其在细胞核、膜的分布发生了改变，膜上表达量明显增加。 5、CCK8实验结果显示FUT8低表达细胞株增殖能力降低;流式细胞分析结果表明FUT8低表组与对照组相比，细胞凋亡无明显影响;而干扰组Bcl-2及cyclinD1蛋白表达水平均有所下降。 结论： 本实验成功构建了FUT8稳定转染低表达细胞株MCF-7、MDA-MB-231;划痕实验和Transwell实验表明FUT8的低表达可以抑制乳腺癌细胞的迁移;CCK8结果显示FUT8能够促进肿瘤的增殖，Bcl-2、cyclinD1的检测结果表明FUT8对MCF-7细胞株和MDA-MB-231细胞株的凋亡能力有一定的影响。综合所有实验结果可知，干扰乳腺癌细胞中FUT8的表达可以抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移，对细胞的生物学行为有一定的影响，对进一步研究乳腺癌的发生发展的分子机制提供了重要信息。