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金黄色葡萄球菌肠毒素B（Staphylococcal enterotoxin B,SEB）是由金黄色葡萄球菌产生并分泌的外毒素,具有耐高温、酸碱、易于制备气溶胶等特点,是引起食物中毒的典型生物毒素,同时也是潜在的生物战剂。因此,SEB对人类健康存在极大威胁,目前已成为多数国家和地区关注的重要生物毒素之一。目前针对SEB的非靶向筛查技术主要是依靠组学及生物标志物来进行研究,需要依靠高效液相色谱、质谱等高分辨率仪器进行分析,难以在各部门实现普及。靶向检测方法主要是依靠抗原抗体的特异性识别作用,包括免疫凝集实验、琼脂糖扩散法和酶联免疫方法等,但常规的免疫学检测方法中单克隆抗体的制备成本较高,批次间差异较大,且难以满足SEB高灵敏度检测的需求。本文立足于食品安全高灵敏及快速新型检测技术的需求,以金黄色葡萄球菌肠毒素B为检测对象,使用抗体和核酸适配体作为SEB的分子识别元件,分别构建基于免疫PCR生物条形码高灵敏检测技术和杂交链式反应（HCR）恒温无酶扩增的荧光快速检测技术,建立高灵敏、快速新型SEB定量生物传感分析方法。其中免疫PCR生物条形码检测方法主要是在抗SEB单克隆抗体和羊抗SEB多克隆抗体的基础上,将羊抗SEB多克隆抗体和DNA barcode修饰在Au纳米颗粒表面,制备了一种羊抗SEB-AuNP-DNA barcode探针。该探针用于取代传统HRP标记的二抗;与此同时,将抗SEB单克隆抗体修饰在磁性纳米材料表面,用于液体食品样品中SEB的快速分离和富集;核酸适配体“分子开关”的杂交链式反应的检测方法是基于荧光共振能量转移设计出一种智能型响应的发卡“开关”。该信号开关主要依靠分子信标优良的信号转导性质。荧光基团6-FAM和猝灭基团BHQ-1分别共价连接在发卡H1茎部的末端。荧光和猝灭基团距离较近时导致6-FAM荧光猝灭,这种结合HCR扩增技术的竞争性适配体生物传感检测方法提供了一种快速、灵敏的荧光检测策略。具体研究结果如下:（1）采用传统双抗“夹心”ELISA检测方法,使用抗SEB单克隆抗体作为包被抗体,羊抗SEB单克隆抗体作为第二抗体。结果表明,SEB在15.63 ng mL-1625 ng m L-1范围内与吸光度值具有良好的线性关系,检测限为0.39 ng m L-1,加标回收率在77.62±5.72%113.64±4.45%之间。（2）使用羊抗SEB多克隆抗体及DNA修饰13 nm的AuNPs,制备了一种羊抗SEB-Au NPs-DNA barcode探针。分别用紫外可见光谱和高倍分辨率TEM进行表征,并使用Mey化稳定实验确定1 m L胶体金标记抗体的最佳用量为200μg m L-1,200μL。其中优化的条件包括AuNPs的添加浓度、MMPs探针的添加量及最佳封闭液的种类和浓度。在最优条件下,SEB在0.001 ng m L-1100 ng m L-1范围内与循环数CT值具有良好的线性关系,检测限为0.269 pg m L-1。加标回收率在89.17±5.07%?110.29±2.52%之间。（3）以SEB核酸适配体序列为基础设计cDNA序列,利用链置换原理设计能够引发杂交链式扩增的发卡序列H1和H2,其中H1设计为类分子信标的形式,构建一种智能化无酶新型荧光传感器。实验优化条件包括H1/H2的添加量、SEB aptamer与H0的比例、反应的p H、HCR扩增时间。在此优化条件下,荧光值大小与SEB标准品的浓度在3.13 ng m L-1100 ng m L-1的范围内具有良好的线性关系,检出限为0.33 ng m L-1,通过牛奶样品的加标回收实验,加标回收率在87.83±2.91%112.68±2.94%之间。本文在传统双抗夹心ELISA的基础上,分别构建免疫生物条形码结合荧光定量PCR、核酸适配体-杂交链式反应的荧光分析检测方法,用于牛奶样品中SEB的高灵敏快速检测。与传统双抗夹心免疫检测方法相比,免疫生物条形码实现了SEB的高灵敏检测,而核酸适配体-杂交链式反应能够提供一种操作简单、快速的检测手段。以上方法根据食品污染的程度可以分别进行SEB的快速和准确筛查,为SEB的现场检测提供更多的思路和平台。