多功能纳米探针的制备及其在动脉粥样硬化诊疗中的应用性能研究

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大多数的急性心血管疾病是由于动脉粥样硬化(AS)斑块的破裂或者侵蚀,形成动脉血栓,导致动脉阻塞或破裂。针对病症的严重程度,动脉粥样硬化的治疗可以分为手术治疗和药物治疗。手术治疗通常应用于疾病发展的中后期,且存在较大风险,故在疾病发展的中前期多采用药物治疗。自从纳米粒子为癌症的治疗提供更安全、更有效的化疗药物以来,纳米粒子被广泛研究用于治疗各种疾病,这也在抗击心血管疾病方面表现出了极大的潜力与希望。纳米递送系统将成像剂或药物递送至目标部位,用于各种疾病的诊断成像或治疗,为检测和治疗动脉粥样硬化提供了新的见解。本论文根据动脉粥样硬化的病理特征,设计了可用于核磁荧光双模态成像的探针。并对纳米递送系统进行设计,为探索动脉粥样硬化等心血管疾病的诊断和治疗提供新的方案。首先利用超顺磁性氧化铁和柠檬酸合成的碳量子点复合制备双模态探针,并对探针进行红外,磁性及荧光检测,确保探针合成及双模态性质的保留。然后设计纳米递送系统,通过原子转移自由基聚合合成聚甲基丙烯酸缩水甘油酯,利用动脉粥样硬化处活性氧响应的特点合成过氧化氢敏感的嵌段聚合物PGMA-PEG,然后修饰靶向巨噬细胞抑制游走因子的靶分子ISO-1和抗动脉粥样硬化药物辛伐他汀(Sim),得到过氧化氢敏感控制探针释放的双亲性聚合物PGMA-PEG-ISO-1-Sim,形成胶束,包覆探针得到PGMA-PEG-ISO-1-Sim@FC。我们通过将双模态探针包覆于过氧化氢敏感型双亲聚合物中,实现了智能响应型双模态探针纳米胶束的制备。对递送系统进行测试与表征,通过核磁氢谱(1H-NMR)、核磁碳谱(13C-NMR)和红外(FT-IR)等测试手段证实了聚合物的合成。利用动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)确定了载药纳米探针的尺寸及球形形貌。利用振动样品磁强计和荧光光谱确定探针成像能力的变化。通过模拟动脉粥样硬化斑块处的过氧化氢浓度,得到了纳米递送对该种刺激的详细情况和成像效果。为了证实该载药纳米探针生物应用的潜力,我们进行材料溶血实验,并利用MTT法对细胞毒性进行了测试,并得到了理想的实验结果。并通过共聚焦显微镜观测载药纳米探针在巨噬细胞与内皮细胞中的摄取情况,观察探针荧光成像效果。然后将纳米探针应用于ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠模型中检测核磁共振成像(MRI)和体内、体外荧光成像效果。最后对实验小鼠进行安全性检测,证实纳米探针的安全性。综合以上实验结果,证实了该纳米探针具有优异的靶向能力和检测效果。另外通过模拟动脉粥样硬化斑块处的过氧化氢浓度,得到了胶束的药物释放情况。MTT法得到载药纳米探针的细胞毒性。刺激兔子颈动脉产生动脉粥样硬化,利用多普勒彩超检测载药纳米探针的治疗效果;并通过分析刺激后颈动脉的斑块及切片分析治疗效果。最后对实验动物进行安全性检测,证实载药纳米探针的安全性。证实了该纳米胶束具有优异的靶向能力和治疗效果。另外利用卵磷脂、胆固醇、载脂蛋白A1和PEG磷脂酰丝氨酸合成重组高密度脂蛋白。并包覆上述合成的双模态探针,得到诊疗一体化纳米粒子。然后对纳米体系进行相关物理化学表征。并行性靶向能力测试、成像能力测试、治疗能力测试等。本文针对动脉粥样硬化,合成两种不同的具有诊疗功能的纳米粒子,并为诊疗一体型载药纳米粒子的设计提供一个新的思路,望在动脉粥样硬化疾病的诊断及治疗方面发挥作用。
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