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目的：慢性粒细胞白血病（CML）是一种发生在多能造血干细胞上的恶性骨髓增生性疾病，是一种慢性骨髓增殖性肿瘤，绝大多数的患者有特异性Ph染色体形成BCR/ABL融合基因，基因编码蛋白的络氨酸激酶活性显著增强，激活癌基因影响细胞增殖分化、凋亡、抑制正常造血而发病。络氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitors, TKIs）是针对BCR/ABL融合基因的靶向治疗药物，但是有部分患者出现耐药。SHIP基因主要表达于造血系统中，是造血系统的重要负调控因子，通过抑制PI3K/Akt通路发挥其作用。本课题意义在于进一步研究SHIP基因在白血病发病中的机理，为寻找白血病治疗的新靶点提供依据。SHIP (SH2-containing inositol polyphosphate5-phosphatase)主要表达于造血系统，参与正常造血调控特别是髓系细胞的发生，是PI3K/Akt通路重要的负调控因子。SHIP经过催化磷脂酰肌醇D-5位磷酸脱磷酸化，将PIP3降解为磷脂酰肌醇-3，4-二磷酸[PI（3，4）P2]，从而下调PI3K下游的信号传导。SHIP可通过抑制PI3K/Akt/GSK-3β途径影响细胞周期，使细胞阻滞于G1期[1]。近来研究表明，SHIP基因突变在白血病发病中占据了重要地位。将小鼠SHIP基因敲除后，出现骨髓细胞高度增生、肝脾肿大以及重要脏器骨髓细胞浸润等类似人类慢性粒细胞白血病（CML）的现象[2]。Metzner等[3]将SHIP基因转染到幼年型粒单核细胞白血病（JMML）患者外周血CD34+细胞内，发现GM-CSF依赖性的增殖及集落形成减少，推测SHIP可有效阻断JMML前体细胞对GM-CSF的超敏性，因而可用于JMML的治疗。磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt/哺乳动物雷帕霉素（mTOR）信号通路（PI3K/Akt/mTOR）在维持细胞的正常生理功能上发挥了重要的作用,它参与细胞的生长、分化和代谢等过程，是身体内重要的信号转导通路之一。PI3K/AKT/mTOR在细胞的生长和存活的调节中经常会失调，该途径可以在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL），急性髓性白血病（AML）和慢性髓细胞性白血病（CML），以及在一些儿童淋巴瘤和淋巴组织增生性疾病中异常激活。PI3K可催化磷脂酰肌醇D-3位磷酸化，将PI-4-P和PI-4,5-P2分别转化为PI-3,4-P2和PI-3,4,5-P3，PIP2和PIP3在此通路中作为第二信使能激活通路下游的分子蛋白激酶B(PKB/Akt)[4]，进一步参与细胞增殖、凋亡等过程。在急性白血病中，可以见到PI3K/Akt信号途径的频繁激活，PI3K通过磷酸化Akt中的Ser473和Thr308，进一步激活其下游的多种效应因子[5,6]。mTOR是PI3K/Akt通路下游的主要作用分子之一，mTOR与PI3K具有高度相似的催化性结构域，因此它是磷酸肌醇3激酶相关激酶家族的成员。mTOR主要通过其下游两个与翻译有关的蛋白4EBP1和p70S6K1（S6K1）发挥作用。4EBP1是真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）的抑制性因子，经过与eIF4E结合进而影响蛋白质合成。因此，PI3K/Akt/mTOR信号转导通路的异常激活，可能在白血病的发生发展以及耐药方面具有重要地位，有望成为治疗白血病的有效靶点。本实验拟在探讨CML患者骨髓白血病细胞SHIP及4EBP1的表达情况。进一步研究SHIP基因在慢性粒细胞白血病发病中所发挥的作用，为白血病的基因治疗提供科学的理论依据。方法：1采集慢性粒细胞白血病慢性期（CML-CP）及急变期(CML-BP)患者骨髓液标本(2-4ml)，骨髓标本均来自于2012-2013年河北医科大学第二医院血液科住院病人共27例，第一实验组为CML-CP，共17例，第二实验组为CML-BP，共10例，所有患者经过MICM即形态学(Morphology,M)、免疫学(Immunology, I)、细胞遗传学(Cytoge-netic, C)和分子遗传学(Moleculargenetics, M)诊断,符合FAB慢性粒细胞白血病的诊断标准。10例健康志愿者作为正常对照组，实验组共27例，包括男15例，女12例，年龄21-67岁，中位年龄44岁，对照组共10例，男5例，女5例，年龄25-50岁，中位年龄36岁，所有骨髓标本提取单个核细胞，-80°C冰箱保存；2realtime-PCR方法检测细胞内SHIP及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关分子（4EBP1）mRNA水平的表达情况；3Western Blot法检测SHIP及4EBP1在蛋白水平上的表达；4统计学分析数据。结果：1本实验所收集的37例临床标本中SHIP基因和4EBP1基因在蛋白和mRNA水平均有表达。2SHIP基因mRNA表达水平realtime-PCR结果显示慢性粒细胞白血病慢性期及急变期SHIP基因mRNA表达水平均比正常对照组表达水平降低（P<0.01），且急变期SHIP基因mRNA表达水平比慢性期表达水平降低（P<0.01）。34E-BP1基因mRNA表达水平realtime-PCR结果显示慢性粒细胞白血病慢性期和急变期4EBP1基因表达水平均比正常对照组表达水平增高（P<0.01），且急变期4EBP1基因表达水平比慢性期表达水平增高（P<0.01）。4SHIP蛋白的表达水平Western结果显示，慢性粒细胞白血病慢性期和急变期SHIP蛋白表达水平均比正常对照组表达水平降低（P<0.01），且急变期SHIP蛋白水平比慢性期蛋白水平降低（P<0.01）。54E-BP1蛋白的表达水平Western结果显示，慢性粒细胞白血病慢性期和急变期4EBP1蛋白表达水平均比正常对照组表达水平增高（P＜0.01），且急变期4EBP1蛋白水平比慢性期蛋白水平增高（P<0.01）。结论：1SHIP基因mRNA表达水平随着CML的病程进展呈降低趋势，蛋白表达水平相一致，考虑SHIP基因的表达与CML的进展相关。24EBP1基因mRNA表达水平随着CML的病程进展呈升高趋势，蛋白表达水平相一致，考虑在CML的进展中4EBP1基因发挥重要作用。