【摘 要】
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四川是猪链球菌（Streptococcus suis）的历史主疫区,此地区2005年曾有过该细菌较大范围感染人的报道,猪链球菌也是近年来危害本地区养猪业发展的主要病原菌。为调查本地区猪链球菌流行血清型、探究本地区猪链球菌的耐药性及优势毒力基因型,我们对2021-2022年四川部分地区养殖场死亡育肥猪的肺部组织进行猪链球菌的分离鉴定和主要生物学特性的研究。研究结果如下:通过采集本地区2021至202
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四川是猪链球菌（Streptococcus suis）的历史主疫区,此地区2005年曾有过该细菌较大范围感染人的报道,猪链球菌也是近年来危害本地区养猪业发展的主要病原菌。为调查本地区猪链球菌流行血清型、探究本地区猪链球菌的耐药性及优势毒力基因型,我们对2021-2022年四川部分地区养殖场死亡育肥猪的肺部组织进行猪链球菌的分离鉴定和主要生物学特性的研究。研究结果如下:通过采集本地区2021至2022年死亡育肥猪病变肺脏样品共计151份,利用TSA培养基分离出32株猪链球菌。使用分型引物分型得到血清型16型10株（10/32）,2型7株（7/32）,9型3株（3/32）,7型1株（1/32）,4型1株（1/32）,30型1株（1/32）,1型1株（1/32）,5型1株（1/32）,无法定型菌株7株（7/32）。以上结果表明:2021至2022年本地区流行的优势猪链球菌血清型为16型。为研究本地区猪链球菌的优势毒力基因型,我们使用特异性引物通过PCR方法检测SS的主要毒力因子的分布情况,包括溶血素基因（sly）、溶菌酶释放相关蛋白基因（mrp）、细胞外因子基因（epf）、毒力相关序列（orf2）和纤连蛋白原结合蛋白（f bps）。结果表明sly检出率最高（13/23）。以sly、mrp、epf基因作为毒力标志进行分型研究,共检出5种毒力基因型,分别是sly+mrp-epf-（11/23）、sly+mrp+epf+（1/23）、sly-mrp-epf-（8/23）、sly-mrp+epf+（1/23）、sly+mrp+epf-（2/23）,优势毒力基因型为sly+mrp-epf-。通过对所分离的24株猪链球菌使用K-B纸片法进行药物敏感性实验,其中对林可霉素的耐药性最高（24/24）,其次是克林霉素为（22/24）,氟苯尼考为（22/24）,对头孢匹罗的耐药性最低（9/24）。对药敏实验结果进行分析发现,2021至2022年四川地区猪链球菌对林可酰胺类药物、恶唑烷酮、大环内酯类的耐药性耐药情况严重,头孢类则耐药性较低。表明头孢类抗生素可以对本地区猪链球菌起到良好的临床效果。为进一步了解菌株的耐药基因分布情况,采用高通量测序技术对药敏实验中2株耐药程度较高的血清16型SS11和SS22菌株进行了全基因组测序。SS11菌株全基因长度为2183722 bp,编码基因个数为2178,GC含量为41.08%。并预测到9个基因岛、5个前噬菌体。SS22菌株全基因长度为2186009 bp,编码基因数为2230,GC含量为41.1%,同时预测到7个基因岛、5个前噬菌体。其基因功能注释结果显示,SS11、SS22菌株碳水化合物转运的能力最为强大,这是细菌实现快速传播的基础。对编码序列进行耐药基因注释,SS11、SS22菌株通过ARDB数据库分别预测到12和10个耐药基因,通过CARD数据库分别预测到10和21个耐药基因,并首次在猪链球菌中预测到vga E、Yaj C、van RM以及gol S基因。通过比对耐药基因型和耐药表型,其耐药表型与耐药基因型保持着较高一致性。采用接合实验对预测到的lsa（E）和optr A基因进行接合实验,在以利奈唑胺为选择药物时,SS11和金黄色葡萄球菌ATCC20923的接合效率依次是4.3×10-7;在以林可霉素为选择药物时,SS11和金黄色葡萄球菌ATCC20923的接合效率依次是3.2×10-6,且在接合后的的金黄色葡萄球菌ATCC20923中检测到lsa（E）和optr A基因。说明lsa（E）和optr A基因在猪链球菌SS11菌株与金黄色葡萄球菌ATCC20923之间可能存在着一定的水平转移能力。
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