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附睾管腔内酸性的微环境以及低HCO3-的浓度对保持精子在静止的状态下完成成熟的过程其非常重要的作用。在本研究的第一部分内容中,我们首先探讨了附睾上皮细胞上H+-ATPase and Na+/HCO3-共转运体(NBC)对附睾管腔微环境的形成和调控作用。
通过运用免疫细胞化学的方法,对H+-ATPase和碳酸酐酶进行标记,证明了在原代培养的附睾尾部上皮细胞中存在亮细胞。在对胞内pH(pHi)的测定中,结合药理学的方法,也能鉴别出主细胞和亮细胞,同时发现主细胞和亮细胞存在不同胞内pHi的调控机制。在主细胞中,酸化回复主要通过NHE完成而在亮细胞中则同时受到NHE和H+-ATPase调控。对胞外pH的测定也证实了抑制亮细胞中的H+-ATPase可以使顶膜面外液体pH升高。同时酸性的pH对精子的活动有抑制作用。
此外通过用NHE的抑制剂amiloride抑制NHE活性后,发现附睾上皮细胞中存在着一种HCO3-介导的酸回复机制。这种HCO3-介导的酸回复依赖于Na+离子,并可以被NBC的特异性抑制剂所抑制。在顶膜面的胞外pH测定中,抑制顶膜面的NBC也可以使胞外pH升高,提示NBC也参与了附睾管腔液pH的调控。
以上结果提示了亮细胞中的H+-ATPase可以功能性地分泌H+到附睾管腔液中,酸化管腔微环境;同时,附睾上皮顶膜面的NBC也能通过对HCO3-的重吸收,进一步降低管腔液的pH值。通过维持附睾液的低pH和HCO3-浓度,从而使精子的活动处于静止的状态,有利于精子的成熟。
在本研究的第二部分中,我们探讨了TRPV2通道在射精过程中的作用。通过RT-PCR,Western blot和免疫组织化学实验,证实了TRPV2蛋白和mRNA表达于阴茎的龟头组织并和龟头外周神经纤维末梢上。在体神经发电实验证实,抑制TRPV2能减少电刺激引起的双向神经电位的幅度,而激活TRPV2则可以增大神经电位的幅度,提示TRPV2可能参与神经中电信号的传导。在整体动物性行为的观察实验中,通过抑制剂或者RNAi干扰降低TRPV2的表达量,都可以增加动物的爬背次数和延长射精时间,说明抑制TRPV2能够降低大鼠阴茎龟头的敏感度,提示TRPV2参与性行为过程中将机械信号转变成电信号的过程。综合上述实验,TRPV2在射精过程中可能是重要的性兴奋感受器,因而在性兴奋的产生和传递过程中起重要的作用。这部分研究成果为进一步研究男性性功能紊乱提供了新的方向。