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目的:克隆小鼠干扰素调节因子3(murine Interferon regulatory factor3,mIRF-3)基因启动子并寻找其核心功能区域,鉴定与mIRF-3基因启动子结合的转录因子,为阐明其表达调控机制奠定基础。方法:以小鼠NIH3T3细胞DNA为模板,采用PCR方法获取mIRF-3基因5’侧翼序列,测序正确后插入pGL3-Basic载体。运用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定其启动子活性。采用缺失分析法分别从mIRF-3基因5’侧翼的5’端逐段缺失,克隆得到不同长度的截短片段,插入pGL3-Basic载体,使用双荧光素酶检测系统定位mIRF-3基因启动子核心功能区域,鉴定其启动子活性。利用点突变技术、染色质免疫沉淀(ChIP)和RNA干扰等实验,分析mIRF-3核心启动子区域的转录因子结合位点。结果:核酸序列测定结果显示,克隆到的mIRF-3基因5’侧翼序列与Genbank中记录完全一致,荧光素酶活性分析结果表明其在NIH3T3细胞中具有较强的启动子活性。结果表明,自5’端缺失的截短片段其活性与pGL3-Basic相比,表现为先升高后降低,-301~+1bp截短片段表现出接近最高的启动子活性,而-196~+1bp截短片段的活性基本消失,提示mIRF-3的核心启动子区域位于-301~-196bp之间。并且-301/-196区域间可能存在核心调控元件。生物信息学预测该区域包含了Sp1、IK1、E2F1、C-MYB、Egr2和YY1等结合位点。点突变结果表明Egr2和YY1具有维持mRF-3的基本转录活性的作用。RNA干扰实验表明Egr2和YY1增强了mIRF-3的启动子活性。染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecitation,ChIP)实验结果表明YY1转录因子与mIRF-3的启动子区有结合。结论:mIRF-3基因的核心启动子区域位于转录起始位点上游-301与-196bp之间,Egr2和YY1在核心启动子调控方面具有关键的调控作用,且二者起正调控作用。