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背景与目的脑缺血后细胞的存活、增殖受多种信号途径的调节。研究显示,神经生长因子受体TrkA途径广泛参与细胞的增殖、分化、凋亡以及炎性调节等过程。抗凋亡蛋白Bcl-2是TrkA的下游靶分子,TrkA经多途径激活Bcl-2后可以阻止细胞凋亡途径。研究证明TrkA/Bcl-2通路具有促神经细胞存活效应。但在脑缺血再灌注损伤中TrkA/Bcl-2通路活性未见报道。近年来发现中药何首乌(polygonummultiflorum thunb)及其活性成分二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbeneglucoside,简称TSG)对脑缺血损伤具有保护作用,但其量效关系与作用机制仍不十分明确。本研究将在大鼠脑缺血-再灌注损伤模型上,通过动态观察大鼠局灶性脑缺血再灌后缺血周边区TrkA与Bcl-2基因/蛋白的表达及小、大两组TSG剂量对二者的影响,结合病理、神经功能和细胞凋亡方面,探讨该药在脑缺血保护作用中的量效关系及其可能机制,以期为脑缺血的防治以及新药的开发提供实验基础。方法250～350g健康雄性SD大鼠,分为5组:正常组(n=6),假手术组(n=6),脑缺血模型组(n=48),TSG小剂量组(n=48),TSG大剂量组(n=48)。TSG小剂量60g/kg/d、大剂量120g/kg/d两种剂量灌胃,给药体积10ml/kg,脑缺血模型组以等量的生理盐水灌胃,第七天灌胃后1 h行Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞模型(MCAO)。按Longa的5级标准评分法评价神经功能缺损。再灌注6 h、24 h、48 h、7 d共4个时间点处死大鼠。分别采用HE染色观察缺血周边区病理学变化;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡;原位杂交方法、免疫组化法检测TrkA、Bcl-2基因/蛋白表达变化。结果1、TSG两种剂量组神经功能缺损程度除6 h外其余时间点低于模型组。2、模型组与TSG两种剂量组再灌注24 h的HE染色均显示出典型的坏死灶和神经丢失。3、正常组与假手术组检测到少量凋亡细胞;模型组与TSG组再灌注6 h后凋亡细胞开始增多,与正常组及假手术组比较差异显著,24 h达高峰,48 h、7 d仍有表达。与模型组对比,除7 d外TSG组减少再灌注其余时间点的细胞凋亡,TSG两种剂量组间无明显差异。4、正常组与假手术组各时间点未检测到TrkA、Bcl-2基因/蛋白的表达。模型组与TSG组TrkA、Bcl-2基因和蛋白的表达变化基本一致,再灌注6 h后出现阳性表达,24 h达到高峰,48 h表达明显下降,7天少量表达。对比模型组,除7 d外TSG治疗组在其余时间点TrkA、Bcl-2基因/蛋白的表达明显上调,两个TSG剂量组间无明显差异。结论1、大鼠脑缺血-再灌注损伤后,可能增强TrkA/Bcl-2通路的活性。2、首乌活性成分TSG的脑保护作用可能通过上调TrkA/Bcl-2通路的活性,从而降低细胞凋亡、脑组织损伤、改善神经功能缺损有关。3、TSG两组剂量对脑保护作用差异不明显,可能与剂量差异太小有关。