论文部分内容阅读
目的: 本实验采用四逆散含药血清处理肝癌HepG2细胞,探讨中药复方四逆散对肝癌HepG2细胞形态及细胞凋亡相关蛋白表达的影响,从分子水平揭示四逆散诱导肝癌细胞凋亡的机制。 方法: (1)制备四逆散药液,并给予SD大鼠四逆散药液灌胃,制备四逆散含药血清。 (2)体外培养的肝癌HepG2细胞,倒置显微镜下观察空白细胞对照组,空白血清对照组,5-FU阳性对照组,四逆散含药血清处理的HepG2细胞低剂量组,中剂量组,高剂量组细胞生长形态,台盼蓝染色进行细胞计数并观察其生长活力。 (3)采用MTT法检测四逆散含药血清对HepG2细胞的抑制作用。 (4)采用流式细胞仪检测四逆散含药血清对HepG2细胞的凋亡影响。 (5)采用流式细胞仪检测四逆散含药血清对HepG2细胞的周期影响。 (6)Hochest33258对四逆散含药血清处理的HepG2细胞染色,荧光显微镜观察细胞凋亡形态。 (7)Rh123(罗丹明123)对四逆散含药血清处理的HepG2细胞染色,流式细胞仪检测线粒体膜电位变化。 结果: (1)四逆散含药血清处理的HepG2细胞,贴壁细胞逐渐减少,形态发生变化,细胞皱缩,逐渐变圆,与空白细胞对照组,空白血清对照组,5-FU阳性对照组比较差异明显,有抑制作用。 (2)MTT结果表明,四逆散含药血清对HepG2细胞有抑制增殖的作用,空白血清对照组,5-FU阳性对照组,四逆散含药血清处理的HepG2细胞低剂量组,中剂量组,高剂量组的24h抑制率分别为1%、14.9%、14.6%、25.5%、33%,四逆散组与对照组比较有明显差异(P<0.05);48h抑制率分别为2.9%、28.7%、26.9%、31.8%、37.9%,四逆散组与对照组比较有明显差异(P<0.05),具有统计学意义。 (3)流式细胞仪检测细胞凋亡结果表明,四逆散含药血清对HepG2细胞有明显的凋亡作用,空白血清对照组,5-FU阳性对照组,四逆散含药血清处理的HepG2细胞低剂量组,中剂量组,高剂量组24h的总凋亡率为13.8%、15.7%、17.6%、24.4%、33%,四逆散组与对照组比较有明显差异(P<0.05);48h的总凋亡率为18.1%、19.6%、20%、40.3%、46.3%,四逆散组与对照组比较有明显差异(P<0.05),具有统计学意义。 (4)细胞周期结果表明,四逆散含药血清处理的HepG2细胞在G1期阻滞,空白血清对照组,5-FU阳性对照组,四逆散含药血清处理的HepG2细胞低剂量组,中剂量组,高剂量组,其G1期的百分比分别为67.5%、72.95%、71.97%、79.72%、81.75%,四逆散组与对照组比较有明显差异(P<0.05),具有统计学意义。 (5)Hochest33258染色结果表明,四逆散含药血清处理的HepG2细胞凋亡现象明显,四逆散组与对照组差异显著。 (6)线粒体膜电位检测结果显示,四逆散含药血清处理的HepG2细胞线粒体膜电位显著下降,空白血清对照组,5-FU阳性对照组,四逆散含药血清处理的HepG2细胞低剂量组,中剂量组,高剂量组的线粒体膜电位分别为156.21%、151.86%、140.52%、111.41%和107.57%,四逆散组与对照组比较线粒体膜电位有明显差异(P<0.05),具有统计学意义。 结论: (1)四逆散含药血清处理的HepG2细胞呈现明显凋亡。 (2)四逆散含药血清处理的HepG2细胞凋亡呈剂量依赖效应。 (3)四逆散含药血清能够抑制HepG2细胞增殖,并通过线粒体途径诱导其凋亡。