中医脾虚证型与老年黄斑变性疾病相关性的实验研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zwj306041732
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目的:通过对老年黄斑变性(AMD)模型小鼠进行中医脾虚证型造模,建立AMD与脾虚证型病证结合的动物模型,并观察中医脾虚证型与AMD之间的相关性。方法:选取20只2月龄C57BL为背景的ApoE基因缺失(ApoE-/-)小鼠,随机分为2月龄ApoE-/-单纯模型对照组组和2月龄ApoE-/-脾虚模型组,每组10只;另外选取10只2月龄C57BL作为空白对照组。脾虚模型组造模采用饮食失节法创建,自然环境中高脂饲料喂养,自由进食、饮水:空白对照组与单纯模型对照组常规饮食及自然环境,自由进食、饮水;喂养4个月后,断头处死并取血,收集眼球;检测血低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)与总胆固醇(TC)的表达;通过免疫组织化学方法检测各组小鼠视网膜重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达;Western blot方法检测每一组小鼠眼球视网膜VEGF的表达;光镜观察小鼠视网膜组织病理性改变;电镜观察小鼠视网膜超微结构的病理性改变。结果:脾虚模型组与单纯模型对照组小鼠体重明显高于空白对照组(P<0.05),而脾虚模型组与单纯模型对照组体重差异不显著;脾虚模型组血TC、LDL-C指标明显高于空白对照组及单纯模型对照组(P<0.05),单纯模型对照组与空白对照组血TC、LDL-C差异不明显;免疫组织化学半定量检测视网膜VEGF及bFGF结果显示,脾虚模型组VEGF明显高于空白对照组(P<0.05),其余组之间的VEGF差异不明显,脾虚模型组bFGF明显高于单纯模型对照组与空白对照组(P<0.05),单纯模型对照组与空白对照组之间的bFGF差异不明显;Western-blot检测视网膜VEGF蛋白量结果显示,单纯模型对照组与脾虚模型组明显高于空白对照组(P<0.05),脾虚模型组明显高于单纯模型对照组(P<0.05);各组小鼠视网膜形态学观察结果显示,单纯模型对照组与脾虚模型组小鼠均出现了RPE细胞基底膜皱褶减少,微绒毛稀疏,其间黑色素颗粒减少,线粒体肿胀,Bruch膜结构粗细不均匀,弹力层断裂等类似AMD样病理改变,且脾虚模型组改变较单纯模型对照组更为明显。结论:对ApoE-/-小鼠进行高脂饮食喂养成功建立了干性AMD模型,可作为实验研究AMD的优势模型;通过高脂饮食喂养成功建立了中医脾虚证型的动物模型:高脂饮食喂养ApoE-/-小鼠视网膜出现了一系列早期AMD的病理表现及脾虚证候表现,证明实验成功将中医脾虚证型与AMD疾病相结合,建立病证结合的中医AMD模型;脾虚模型组较单纯模型组更显著的AMD病理改变说明了中医脾虚证型与AMD之间的密切联系。
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