论文部分内容阅读
目的1.观察该复方中草药合剂在体外对HCMV感染的U251胶质瘤干细胞(GSCS)增殖及凋亡的影响。2.探讨该复方中草药合剂及联合更昔洛韦在体内对HCMV感染的U251GSCS移植瘤的生长及其血管生成的影响。方法1.根据莪术、冬凌草、白花蛇舌草抗病毒抗肿瘤特性制备抗胶质瘤复方中草药配方,将三种中草药提取物溶于培养基中,制备不同浓度的复方中草药合剂。2.用HCMV AD169毒株感染人胚肺成纤维细胞(HELF)进行病毒扩增,并用空斑定量法测HCMV滴度。3.用单克隆培养法从U251胶质瘤细胞系中分离出GSCs,用流式细胞仪检测U251GSCS中CD133+细胞的比例。4.U251GSCS接种HCMV(MOI=1),实验组加入不同药物浓度复方中草药合剂,对照组加入相同体积的培养基。培养48h后,用MTT法检测各组细胞活性。5.用RT-PCR检测各组细胞中HCMV基因IE-1、抑制凋亡基因Bcl-2及促进凋亡基因Bax m RNA的表达,Western blot检测各组Bcl-2及Bax蛋白表达的情况。6.将感染HCMV的U251GSCS移植到裸鼠颅内14d后,将裸鼠随机分为复方中草药合剂组、更昔洛韦组、复方中草药合剂联合更昔洛韦组及空白对照组。采用灌胃给药的方式治疗裸鼠,14天后处死裸鼠,取出脑组织中的肿瘤组织做病理检查。7.用免疫组化检测肿瘤中IE-1、CD34蛋白表达,并计算肿瘤微血管密度(MVD),RT-PCR检测肿瘤中Bcl-2、Bax m RNA的表达。结果1.U251GSCS在无血清培养基中悬浮生长,细胞呈球形,流式细胞仪结果显示,U251GSCS中CD133+细胞数达95%以上。2.MTT结果显示,复方中草药合剂可抑制细胞增殖,随着复方中草药合剂浓度及作用时间的增加,HCMV感染的U251GSCS活性降低(P<0.05)。3.软琼脂克隆形成实验结果表明,该复方中草药合剂可明显抑制HCMV感染的U251GSCS的克隆形成,且随着药物浓度的增加,抑制效果越明显(P<0.01)。4.RT-PCR结果显示,HCMV感染的U251GSCS与不同浓度复方中草药合剂培养48h后,细胞内促凋亡基因Bax m RNA的表达量增加,HCMV基因IE-1和抑凋亡基因Bcl-2m RNA的表达量减少(P<0.05)。5.Western blot结果显示,HCMV感染的U251GSCS在不同浓度复方中草药合剂作用48h后,Bax蛋白表达量随着药物浓度的增加而增多,而Bcl-2蛋白表达量随着药物浓度的增加而减少(P<0.05)。6.复方中草药合剂和更昔洛韦均能减少HCMV感染的U251GSCS移植瘤微血管的生成(P<0.05),联合用药抑制移植瘤微血管生成较单独用药组效果明显,二者无交互作用(P>0.05)。7.RT-PCR结果显示,复方中草药合剂和更昔洛韦能抑制移植瘤细胞内Bcl-2 m RNA的表达(P<0.05),并促进Bax m RNA的表达(P<0.05)。联合用药组Bcl-2 m RNA相对表达量明显低于复方中药组、更昔洛韦组和对照组(P<0.05),联合用药组Bax mRNA相对表达量明显高于复方中药组、更昔洛韦组和对照组(P<0.05)。结论1.该复方中草药合剂在体外能抑制HCMV感染的U251GSCS的增殖并诱导其凋亡。2.该复方中草药合剂可通过抑制肿瘤血管生成、诱导胶质瘤细胞凋亡从而抑制HCMV感染的U251GSCS原位移植瘤的生长。