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疏水电荷诱导色谱(HCIC)是利用依赖于pH值的可离子化对偶式化合物为配基,实现生物大分子分离的新型液相色谱技术。HCIC中,蛋白质在介质表面的吸附是通过在接近生理条件下的温和疏水作用完成的,无需有机溶剂或其他盐类的参与;蛋白质的解吸是通过调节流动相的pH值,由此配基与目的产物带上相同电荷并产生静电排斥作用而使目标产物得以洗脱。HCIC无需对原料进行预处理,即无需调整pH值,离子强度等,因此降低了生物分离纯化的成本。本文主要详细阐述了HCIC色谱介质的活化,配基的筛选与偶联,以及新型HCIC配基5-AI-Sepharose CL-6B对模式蛋白溶菌酶(Lysozyme)的分离纯化水平,主要包括以下四个方面:1.以吲哚基团作为前导结构,利用MDL数据库通过结构相似性筛选原则及Marvinsketch软件计算pKa值获得新型HCIC色谱配基5-氨基吲哚作为实验配基。2.以琼脂糖凝胶Sepharose CL-6B为初始介质进行活化,在介质上高密度修饰环氧集团,确定最佳活化反应条件:环氧氯丙烷的浓度10 % (v/v),NaOH的浓度0.8 mol/L,反应时间2.5 h,反应温度40°C,反应转速170 rpm,环氧集团修饰密度可达100μmol/mL以上。确定配基偶联条件:反应温度49°C,反应时间20 h,反应转速170 rpm,配基修饰密度可达80-85μmol/mL。3.以溶菌酶为主要模式蛋白考察新型HCIC介质5-AI-Sepharose CL-6B在不同离子强度和pH值条件下的静态吸附容量及动态吸附容量。结果表明,在离子强度0-3.0 mol/L流动相中,介质对Lysozyme的静态吸附容量在40 mg/g wet resin到51 mg/g wet resin范围内变化;与此同时随离子强度增大介质对Lysozyme的动态吸附容量由10.4 mg/mL增至23 mg/mL。当pH从3升高至9时,介质的饱和吸附容量变化较大,与HCIC色谱机理相吻合;对Lysozyme的动态吸附容量在2.43 mg/mL至9.05 mg/mL范围内波动。4.考察5-AI-Sepharose CL-6B介质填充柱对Lysozyme的分离纯化效率。在流动相盐浓度由50 mmol/L变化到1000 mmol/L时,HCIC新型介质5-AI-Sepharose CL-6B对溶菌酶的回收效率达到90%,初步验证了这一新型HCIC色谱介质的优良性能。