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抑郁症是最常见的精神障碍疾病，其高死亡率、高致残率，已成为21世纪最重要的引起人类残疾的疾病。有关抑郁症的发病机理，目前尚无定论，近年来国内外学者高度关注神经重塑障碍假说，临床和动物实验研究发现，抑郁症的发生发展伴随着海马神经重塑功能障碍，而抗抑郁剂的起效与其逆转神经再生有关。但海马神经再生作为抑郁症及抗抑郁剂的终靶点，其中涉及的信号传导通路尚不明了。Notch信号通路在成年期动物海马区持续表达，且发挥促进神经重塑的作用。癫痫、脑缺血、Alzheimer’s病等疾病状态下Notch信号系统通过调节自身的功能状态，调节神经干细胞的增殖、神经细胞轴突和树突的生长，对成年期中枢神经系统的再生有重要作用。
抑郁症的神经重塑障碍假说和Notch1信号通路的特性，促使我们深入思考：Notch1信号系统是否参与慢性应激模型大鼠海马神经再生障碍?Notch1信号系统是否参与氟西汀介导的正常大鼠海马神经再生上调?Notch1信号系统在抑郁模型大鼠氟西汀治疗前后海马神经再生中的作用?这正是本课题关注的焦点。立足于抑郁症深入探讨Notch1信号系统及其神经重塑相互作用的研究国内外尚未见报道。
第一部分：Notch1信号系统与抑郁模型大鼠海马神经重塑障碍
目的：了解大鼠抑郁模型中海马神经重塑障碍与Notch1信号系统功能改变的关系。
方法：应用慢性不可预知温和应激和孤养法建立抑郁模型，分为对照组、CUMS14d组、CUMS28d组，采用免疫组化、免疫荧光、realtimePCR和Westernblot，测定大鼠海马神经干细胞的增殖、存活和分化以及Notch1信号通路各个因子(Notch1、Hes1、Hes5、Jag1)的基因及蛋白表达水平的改变。
结果：(1)应激前各组体重、糖水偏好、旷野试验、强迫游泳评分均无显著差异(P>0．05)。应激14天后，与对照组相比，CUMS组大鼠体重增长幅度明显降低(P<0．05)，糖水偏好显著降低(P<0．001)，旷野试验中水平得分与垂直得分均显著降低(P<0．01)，强迫游泳中漂浮不动时间显著增加(P<0．001)。应激28天后，与对照组相比，CUMS组大鼠体重、糖水偏好、旷野实验水平和垂直得分均显著降低(P<0．05或P<0．001)，强迫游泳中漂浮不动时间显著增加(P<0．001)，差异均有统计学意义。(2)海马神经干细胞增殖和存活：与对照组比较，14dCUMS组和28dCUMS组海马齿状回BrdU阳性细胞数均减少，差异有统计学意义(P<0．001)。神经干细胞分化：与对照组比较，CUMS组NeuN/BrdU、GFAP/BrdU比例无明显差异(P>0．05)。(3)与对照组比较，CUMS背景组随应激时间的延长海马NICDmRNA、HeslmRNA、Hes5mRNA和Jag1mRNA基因表达水平明显降低(P<0．01或P<0．001)，差异有统计学意义。与对照组比较，CUMS组海马NICD、Hes1、Hes5和Jag1蛋白水平均明显降低(P<0．01或P<0．001)，差异有统计学意义。
结论：应用慢性不可预知温和应激和孤养法建立模型成功模拟抑郁状态；抑郁大鼠海马齿状回神经干细胞增殖和存活受到抑制，分化无改变；同时，大鼠海马Notch1功能下调。提示Notch1信号系统可能参与慢性应激模型大鼠海马神经再生障碍。
第二部分：Noteh1信号系统与氟西汀介导的正常大鼠海马神经再生的上调
目的：了解慢性氟西汀干预正常大鼠所导致的海马神经再生上调与Notch1信号系统功能改变的关系。
方法：应用大鼠腹腔注射氟西汀建立在体模型，分为对照组、14天干预组、28天干预组，采用免疫组化、realtimePCR和Westernblot，测定大鼠海马神经干细胞的增殖、存活和分化以及Notch1信号通路各因子(Notch1、Hes1、Hes5、Jag1)的基因及蛋白表达水平的改变。
结果：(1)神经干细胞增殖和存活：与对照组比较，14d和28d氟西汀干预组海马齿状回BrdU阳性细胞数均增加(P<0．001)，差异有统计学意义。神经干细胞分化：与对照组比较，氟西汀干预组NeuN/BrdU、GFAP/BrdU比例无明显差异(P>0．05)。(2)与对照组比较，Flu组随氟西汀干预时间的延长NICDmRNA、Hes1mRNA、Hes5mRNA和Jag1mRNA基因表达明显增加(P<0．01或P<0．001)，差异有统计学意义。与对照组比较，Flu组NICD、Hes1和Jag1蛋白水平明显升高(P<0．01，P<0．05或P<0．001)，差异有统计学意义，但Hes5蛋白水平无改变(P>0．05)。
结论：氟西汀促进大鼠海马齿状回神经干细胞的增殖和存活，但对分化无影响；同时，海马Notch信号功能激活，提示Notch1信号系统可能参与氟西汀介导的大鼠海马神经再生上调。
第三部分：Noteh1信号系统在氟西汀逆转抑郁模型大鼠海马神经重塑中的作用
目的：利用抑郁大鼠模型探讨Notch1信号系统在海马神经再生障碍中的作用。
方法：应用慢性不可预知温和应激建立抑郁模型，分为对照组、对照+Flu组、CUMS组，CUMS+Flu组，采用免疫组化、realtimePCR和Westernblot，测定大鼠海马神经干细胞的增殖、存活以及Notch1信号通路各个因子(NICD、Hes1、Hes5、Jag1)的基因及蛋白表达水平的改变。
结果：(1)干预前各组体重、糖水偏好、旷野试验、强迫游泳评分均无显著差异(P>0．05)。干预后，与对照组相比，CUMS组糖水偏好、水平得分和垂直得分明显降低，大鼠漂浮不动时间显著增加(P<0．001)，差异有统计学意义；与CUMS组比较，CUMS+Flu组糖水偏好、水平得分和垂直得分明显增加，大鼠漂浮不动时间显著降低(P<0．01或P<0．001)，差异有统计学意义；各组间体重差异不显著(P>0．05)。(2)神经干细胞的增殖：与CUMS组比较，CUMS+Flu组海马齿状回BrdU阳性细胞数显著增加(P<0．001)，差异有统计学意义；神经干细胞的存活：与CUMS组比较，CUMS+Flu组海马齿状回BrdU阳性细胞数显著增加(P<0．001)，差异有统计学意义。(3)CUMS+Flu组NICD、Hes1、Hes5和Jag1的基因表达水平较CUMS组显著上升(P<0．001)，差异有统计学意义。CUMS+Flu组的NICD、Hes5和Jag1蛋白水平较CUMS组显著上升(P<0．001)，但Hes1的蛋白水平无明显上升(P>0．05)。
结论：(1)Notch1信号系统可能参与慢性应激模型大鼠海马神经再生障碍；(2)氟西汀通过上调Notch1信号系统改善海马神经再生，从而缓解大鼠抑郁症状。
第四部分：Notch1信号通路在氟西汀调控胎鼠神经干细胞增殖中的作用
目的：探讨Notch1信号系统在氟西汀促进神经干细胞(NSCs)增殖中的作用。
方法：不同浓度的氟西汀干预体外培养的神经干细胞，通过四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测其对细胞活力的影响，获取最适作用浓度。分别予Notch1信号通路抑制剂DAPT和氟西汀干预神经干细胞后，采用MTT检测神经干细胞的增殖，RealtimePCR、Westernblot法检测Notch信号各因子的基因和蛋白表达。
结果：(1)氟西汀浓度超过40μmol/L浓度时，可降低NSCs活性，差异有统计学意义(P<0．01或P<0．05)；(2)不同浓度的氟西汀干预细胞48h后，10μmol/L/、15μmol/L和20μmol/L组NSCs的活性高于0μmol/L组，差异有统计学意义(P<0．01)；(3)与对照组相比，氟西汀组的细胞活性增高，DAPT组的活性降低，差异均有统计学意义(P<0．001)。与氟西汀干预组相比，氟西汀+DAPT组细胞活性降低，差异有统计学意义(P<0．001)；(4)与对照组相比，DAPT组Hes1和Hes5蛋白表达水平显著降低(P<0．001，P<0．05)；与对照组相比，氟西汀组NICD、Hes1和Hes5蛋白表达水平显著增高(P<0．001，P<0．05orP<0．01)；与氟西汀干预组相比，氟西汀+DAPT组的NICD因子、Hes1因子和Hes5因子蛋白表达水平均显著降低(P<0．001)，差异有统计学意义。
结论：(1)氟西汀促进神经干细胞的增殖；(2)氟西汀可以上调Notch1信号系统的表达；(3)氟西汀可能通过调控Notch1信号的传导促进NSCs的增殖