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研究目的:蒽林(1,8-二羟基-9-蒽酮,dithranol,dit),又称地蒽酚,是现今治疗及控制寻常型银屑病的一线药物。目前普遍认为,其作用机制为该药在体内抑制了角质形成细胞的增殖及相关炎性细胞功能。银屑病(psoriasis)是多基因遗传背景下的自身免疫、自身炎症性疾病,具有皮肤和全身的表现,其发病机制复杂,不但与先天性免疫系统(包括中性粒细胞、树突状细胞等)有关,而且与获得性免疫系统也有重要关联。调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)是机体内具有下调免疫应答、维持自身免疫耐受以及抑制自身免疫性疾病发生的重要调节性细胞,它在治疗自身免疫性疾病和肿瘤以及克服器官移植排斥反应等方面具有应用前景。银屑病作为一种自身免疫性疾病,其发生发展与Treg细胞密切相关,而蒽林是否通过影响Treg细胞治疗银屑病,目前尚无相关报道。因此,探讨和明确蒽林是否通过调控Treg细胞而影响银屑病的发生发展,对进一步认识蒽林治疗银屑病的作用机制具有重要意义。研究方法:1.以蒽林涂抹C57BL/6小鼠皮肤,溶剂丙酮(acetone,ace)涂抹作为对照,Day6流式检测小鼠双侧引流淋巴结中Treg细胞比例、增殖、功能及活化相关分子的变化。2.无菌取CD45.1~+OT-II小鼠脾脏制备单细胞悬液,细胞增殖染料Efluor450(e450)标记,流式细胞荧光分选技术(Fluorescence Activated Cell Sorting,FACS)分选CD4~+CD62L~+TCR Vα~+TCR Vβ~+T细胞(na?ve T细胞),尾静脉回输至ace/dit分别涂抹六天后的CD45.2~+小鼠体内,回输后24 h于小鼠尾根部皮下注射鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA),免疫后72h流式检测小鼠双侧腹股沟淋巴结特异性CD45.1~+na?ve T细胞增殖情况,以明确蒽林刺激产生的Treg细胞是否具有体内免疫抑制功能。3.于Day0、Day6和Day12用ace/dit分别涂抹正常C57BL/6小鼠皮肤,于Day4至Day13每天于小鼠背部涂抹凡士林(vaseline,vas)或咪喹莫特(imiquimod,IMQ)乳膏(含5%)诱导小鼠银屑病模型,于Day14拍照记录小鼠背部银屑病发生发展情况并取皮肤进行HE染色,流式检测小鼠双侧腹股沟引流淋巴结中Treg细胞比例及增殖情况。4.于Day-9至Day9每隔一日对C57BL/6小鼠和Foxp3-DTR小鼠腹腔注射DT,并于Day-4开始每六日ace/dit处理小鼠一次,于Day0至Day9每日于小鼠背部涂抹vas/IMQ乳膏诱导银屑病模型,Day10处死小鼠,拍照记录小鼠背部银屑病发生发展情况,进行银屑病面积与严重性指数评分(Psoriasis Area and Severity Index,PASI评分),并取皮肤进行HE染色,观察Treg细胞缺失对蒽林治疗小鼠银屑病效果的影响。结果:1.与对照组相比,蒽林处理后C57BL/6小鼠皮肤引流淋巴结Treg细胞的比例及增殖均增加,Foxp3、GITR及PD-1表达水平升高。说明蒽林可显著诱导Treg细胞扩增,且免疫抑制功能增强。2.回输CD45.1~+na?ve T细胞的小鼠经蒽林处理后,体内未增殖的CD45.1~+na?ve T细胞明显高于丙酮组,提示na?ve T细胞增殖受到抑制,可能与蒽林诱导Treg细胞扩增导致机体产生免疫耐受有关。3.蒽林处理IMQ诱导的银屑病模型小鼠,皮肤HE染色可见其银屑病样改变较ace组略有减轻。与ace组相比,涂抹蒽林后,C57BL/6小鼠皮肤引流淋巴结内Treg细胞的比例及增殖均上升,说明在使用IMQ构建的小鼠银屑病模型中,蒽林可诱导Treg细胞扩增,并有效减轻小鼠银屑病的发生。4.Foxp3-DTR小鼠注射DT后Treg细胞清除率可达96.6%。IMQ诱导银屑病模型组C57BL/6小鼠PASI=3,Treg细胞缺陷小鼠PASI=4,HE染色均可见银屑病样改变,且DTR小鼠更为严重。蒽林处理后,可见C57BL/6小鼠PASI=1,较未治疗组减轻;Treg细胞缺陷小鼠PASI=4,较未治疗组无明显改善,病理学改变与肉眼观察结果一致。说明蒽林对IMQ诱导银屑病的小鼠具有治疗作用,而Treg细胞缺失后,蒽林的治疗作用则相应减弱。结论:蒽林可诱导小鼠体内调节性T细胞扩增,从而减弱咪喹莫特诱导的小鼠银屑病。敲除Treg细胞,蒽林对银屑病的治疗作用减弱。因此,蒽林诱导的Treg细胞扩增是治疗银屑病的重要作用机制之一。