论文部分内容阅读
背景：肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的发生是一个遗传学和表观遗传学调节的多基因级联过程,这一过程表现为癌基因激活和(或)抑癌基因的失活。除遗传学变化外,在肿瘤的发生过程中表观遗传机制也起着非常重要的作用。表观遗传改变的两个最主要机制就是DNA甲基化和组蛋白修饰。其中DNA甲基化状态受到DNA甲基转移酶NA methyltransferase, DNMTs)的调控。其中DNMT1为维持型甲基转移酶,作用是识别子代DNA双链中亲代单链上已甲基化的CpG位点,然后催化互补单链的胞嘧啶发生甲基化。此外,DNA甲基化结合蛋白(methyl-CpG binding domain,MBD)为细胞中促发甲基化作用的蛋白之一。其中MBD2蛋白通过选择性结合甲基化的DNA,与其他相关蛋白协同参与甲基化有关的转录阻遏、染色质构型和基因转录。甲基化相关沉默目标-1(target of methylation2induced silencing1, TMS1)是一种较新的CpG岛相关的抑癌基因,具有促进细胞凋亡、调节NF-γB活性和活化caspase等多种功能。已有研究证明TMS1在多种恶性肿瘤的发生中起着重要的作用。目的：为了探讨DNA甲基化异常在HCC发病中的作用及机制,本文主要检测HCC患者血清TMS1基因启动子区甲基化状态,MBD2基因和DNMT1基因的表观遗传学变化,以及组蛋白修饰与肝癌的关系。探讨HCC患者TMS1基因启动子甲基化的临床早期诊断意义。方法：采集山东大学齐鲁医院2009年～2011年的48例HCC患者手术切除标本及相应非肿瘤肝组织(>3cm)标本。-80℃冰箱保存。采用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR, MSP)检测37例HCC患者、26例乙肝患者和23例正常人群外周血血清中TMS1基因启动子甲基化情况；运用免疫组织化学法(Immunochistochemistry, IHC)检测48例HCC患者肝组织及及相应非肿瘤肝组织(>3cm)中TMS1、MBD2和DNMT1蛋白表达情况。结果：HCC患者、乙型肝炎患者血清TMS1基因甲基化检出率为70.30%(11/37)、50.00%(13/26),而正常对照组的血清未检测出,差异有统计学意义。TMS1在癌、癌旁正常肝组织中的阳性表达率分别为26.08%(10/48)、97.92%(47/48)；MBD2分别为18.75%(9/48)、80%(38/48)；DNMT1分别为77.08%(37/48)、32.25%(15/48),差异有统计学意义(P<0.051。数据显示在HCC血清中TMS1基因异常甲基化与TMS1蛋白表达之间有着密切的关系(P<0.05)。结论：在HCC发生发展过程中,TMS1基因的高甲基化与TMS1蛋白表达下降相关,这表明TMS1的异常甲基化可以诱导活体内基因沉默。实验表明TMS1基因CpG岛甲基化是在HCC肝癌组织中发生的,正常组织没有发生。MBD2可能参与TMS1基因甲基化使该基因失活的过程。DNMT1、MBD2在TMS1诱导的HCC启动子高甲基化过程中可能起着重要的作用。TMS1基因启动子区域的异常甲基化可能导致其基因转录表达失活,使其蛋白表达下降,这在HCC的发生过程中起着重要的作用,这些相关基因的甲基化谱作为新的无创性的临床诊断的分子标志物,也可作为HCC的早期筛查、诊断及预测预后的指标。