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背景:肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)约占成人恶性肿瘤的2%~3%,而肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是最常见和最具侵略性的肾癌类型,约占所有肾脏肿瘤的75%。虽然不断有新的靶向药物问世,但仍不适用于全部患者。因此,深入研究肾透明细胞癌发生发展的分子机制,探索肾透明细胞癌治疗的新靶点,有助于实现肾透明细胞癌的精准治疗。随着分子研究的发展,对长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)的研究使我们对肿瘤有了全新的理解。虽然LncRNA不编码蛋白质,但会与蛋白质在多种信号通路中直接相互作用而影响细胞功能。因此,研究LncRNA在肾透明细胞癌中的作用机制具有重要意义。目的:通过对多个公共数据库数据的分析和对收集的组织标本检测Linc00472在肾透明细胞癌中的表达水平,初步构建Linc00472在肾透明细胞癌中的调控网络,为后续进一步研究Linc00472在肾透明细胞癌中的作用机制,以及对肾透明细胞癌的诊断、治疗和预后的影响提供生物信息学方面的理论依据。方法:1.通过CRN数据库对肾透明细胞癌中差异表达的LncRNA及蛋白质编码基因进行筛选,寻找在Ⅰ~Ⅳ级肿瘤中均差异表达的LncRNA,然后确定进一步研究的LncRNA—Linc00472。2.通过GEPIA2平台对Linc00472在肾透明细胞癌中的表达水平及预后进行分析。3.通过qRT-PCR验证Linc00472在临床标本中的表达情况以及对患者的临床数据进行分析。4.通过Co-LncRNA数据库筛选与Linc00472共表达的差异基因,并对其进行GO/KEGG富集分析,寻找Linc0472可能参与的途径。5.对共表达差异基因进行PPI网络的构建,通过MCODE应用寻找发挥主要功能的模块,并对模块进行GO/KEGG富集分析,得到功能模块要参与的途径。6.通过AnnoLnc2平台得到与Linc00472相互作用的miRNA,使用miRCancer数据库对miRNA进一步过滤,然后通过miRWalk数据库对miRNA进行靶基因预测,将预测后的靶基因与共表达差异基因进行关联,得到可能发挥重要功能的关键基因。结果:1.共筛选出符合标准的差异表达的LncRNA有359个,其中上调的有243个,下调的有116个。共筛选出符合标准的差异表达的蛋白质编码基因有1245个,其中上调的有679个,下调的有566个。2.对523例癌组织与72例癌旁组织中Linc00472的表达水平进行分析,癌组织中Linc00472的表达明显降低(P<0.05)。对不同病理分级的癌组织中Linc00472的表达水平分析后发现,Ⅰ、Ⅱ级中Linc00472的表达水平比Ⅲ、Ⅳ级更高。对Linc00472的表达水平与预后的关系进行分析,发现Linc00472高表达组的患者总生存期(overall survival,OS)及无病生存期(disease free survival,DFS)均优于低表达组的患者,Linc00472的表达水平与患者预后密切相关(P<0.05)。3.对22例肾透明细胞癌患者的癌组织及与其配对的癌旁组织进行了qRTPCR验证,发现Linc00472在癌组织中表达降低(P<0.0001)。根据22例患者癌组织表达水平的中位数把其分为高表达组和低表达组,统计结果显示,Linc00472的表达水平与患者性别(P=1.000)、年龄(P=0.387)以及肿瘤大小(P=0.395)均无明显相关性,而Linc00472在Ⅰ、Ⅱ级癌组织中的表达水平明显高于Ⅲ、Ⅳ级癌组织(P=0.024)。4.筛选出与Linc00472在Ⅰ~Ⅳ级癌组织和癌旁组织中均差异表达的共表达基因,包含519个上调基因和479个下调基因。然后对上调和下调的共表达差异基因分别进行富集分析,结果显示上调的共表达差异基因主要参与了免疫应答等过程,下调的共表达差异基因主要参与了代谢过程。5.对998个共表达差异基因进行关联,可视化后一共得到了578个节点,2225条边线。其中人类白细胞抗原(Human Leukocyte Antigen,HLA)的不同亚型关联程度很高,HLA-A(degree=36),HLA-E(degree=36),HLA-C(degree=35),HLA-DRB1(degree=35),HLA-DRA(degree=35)。经MCODE分析后,从PPI网络筛选出两个模块,模块1有40个节点,390条边线,功能分数为20;模块2有66个节点,481条边线,功能分数为14。模块1主要参与了免疫应答等过程,模块2主要参与了血管生成等过程。6.在AnnoLnc2中获得的与Linc00472相互作用的miRNA经过miRCancer数据库的过滤后,通过miRWalk预测其靶基因,并与PPI网络中的共表达差异基因进行关联,共得到了42个与Linc00472相互作用的miRNA,构建了miRNA与其靶基因的调节网络。对靶基因预测结果进行分析,认为miR-24-3p与其靶基因HLA-DPB1、CXCL9、TNFR2、CD36和COL4A1,miR-221-3p与其靶基因C3aR1以及miR-17-5p与其靶基因HLA-DQA1/HLA-DQB1、C3aR1/C5aR1在肾透明细胞癌中可能发挥重要作用。结论:Linc00472在肾透明细胞癌组织中的表达水平明显低于癌旁正常组织,其低表达与Furman高分级密切相关。Linc00472的低表达与肾透明细胞癌患者的不良预后相关。蛋白互作和功能富集分析结果表明,在肾透明细胞癌中上调的基因可能发挥主要功能。靶基因预测结果分析表明,Linc00472可能作为ceRNA在miR-24-3p—HLA-DPB1途径,miR-24-3p—CXCL9途径,miR-221-3p—C3aR1—VEGFR2途径,miR-17-5p—HLA-DQA1/HLA-DQB1途径,以及miR-17-5p—C3aR1/C5aR1—VEGFR2途径中发挥重要功能。此外,miR-24-3p与TNFR2(TNFRSF1B)、CD36和COL4A1之间的调控关系也应被注意。对于Linc00472在肾透明细胞癌的诊断和治疗方面的价值值得进一步深入研究。