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长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类长约200～200,OO0个核苷酸、不编码蛋白质的新型RNA分子,在表观遗传、基因转录及转录后水平调控基因表达,并能够与蛋白、核酸互相作用,参与多种生理和病理过程的调控,近年来成为生命科学界研究热点之一。越来越多研究表明,lncRNA在多种癌细胞异常表达,并在癌症的起始、发展、侵袭及转移等过程中发挥重要功能。近年来,乳腺癌在女性恶性肿瘤中发病率跃居首位,并在城市女性中发病率急速增加。乳腺癌发生、发展、转移等过程受到多基因、多因素的复杂调控,包括非编码基因microRNA和lncRNA。其中LncRNA HOTAIR特异调控乳腺癌转移,被视作lncRNA调控癌症领域的里程碑。不同lncRNA分子对乳腺癌的调控功能和作用机制各异。阐明乳腺癌发生和转移的分子机制,有助于建立合理的预防和治疗方案,更有助于提高患者的长期生存率及改善生活质量。 本研究首先通过本课题组自主设计lncRNA引物库,并用实时定量PCR对其一一进行验证,开发出特异性高、检测范围广和简单实用的乳腺癌lncRNA表达谱芯片。通过lncRNA表达谱芯片分析乳腺癌细胞中异常表达的lncRNA。分析了10类乳腺癌细胞的lncRNA表达特征,寻找出多个差异表达的lncRNA。从中选取lncRNA CCAT2作为研究重点,首先在40对乳腺癌患者组织标本中进行验证,通过质核分离和RT-qPCR方法确定其亚细胞定位,并在体外的MDA-MB-231乳腺癌细胞系中转染过表达载体pcDNA3.1-CCAT2和阴性对照PCDNA3.1 vector,深入研究了lncRNA对基底类乳腺癌细胞系MDA-MB-231的细胞增殖、迁移等生物学行为的影响。 (1)乳腺癌细胞中lncRNAs的差异表达 lncRNA表达谱芯片结果可知,lncRNA CCAT2在乳腺癌细胞系中均低表达,并在临床标本中得到证实。 (2)lncRNA CCAT2亚细胞定位分析 通过质核分离,分别检测细胞浆和细胞核内CCAT2表达,结果显示,lncRNA主要定位在细胞核里。 (3)lncRNA CCAT2对细胞增殖、迁移的影响MTT实验和Ki67细胞免疫荧光染色表明,lncRNA CCAT2能抑制乳腺癌细胞的生长,迁移实验也显示lncRNACCAT2转染到MDA-MB-231细胞后能显著抑制其迁移能力。 综上所述,乳腺癌lncRNA表达谱芯片和实时定量PCR均证实lncRNACCAT2在乳腺癌细胞和组织中表达显著降低。lncRNA CCAT2主要定位于细胞核。体外研究证实lncRNA CCAT2过表达可显著抑制乳腺癌癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移。因此,提示lncRNA CCAT2在人基底类乳腺癌中是潜在的抑癌lncRNA,可作为临床治疗乳腺癌的潜在靶点。