【摘 要】
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猕猴桃是呼吸跃变型水果,采收后果实的硬度呈下降趋势,其软化程度是判段果实成熟度的重要指标。淀粉降解与猕猴桃果实软化的关系十分密切,直接影响到果实的贮藏性和货架期。淀粉合成并储藏于淀粉体中,因此研究猕猴桃果实淀粉体中淀粉代谢对于揭示淀粉降解与果实软化具有重要的理论意义和应用价值。本研究以美味猕猴桃海沃德（Actinidia deliciosa Hyward,HWD）、中华猕猴桃金果（Actinidi
【基金项目】
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国家重点研发计划（2018YFD1000200）；
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猕猴桃是呼吸跃变型水果,采收后果实的硬度呈下降趋势,其软化程度是判段果实成熟度的重要指标。淀粉降解与猕猴桃果实软化的关系十分密切,直接影响到果实的贮藏性和货架期。淀粉合成并储藏于淀粉体中,因此研究猕猴桃果实淀粉体中淀粉代谢对于揭示淀粉降解与果实软化具有重要的理论意义和应用价值。本研究以美味猕猴桃海沃德（Actinidia deliciosa Hyward,HWD）、中华猕猴桃金果（Actinidia chinensis Jinguo,JG）和中华猕猴桃红阳（Actidinia chinensis Hongyang,HY）三种不同贮藏性的猕猴桃果实为材料,以淀粉体为主要研究对象,利用细胞生物学,蛋白质组学等研究手段研究了果实成熟和软化过程中淀粉体的结构特征及差异表达蛋白,对控淀粉降解的可能机制展开了研究,主要结果如下:1、不同猕猴桃品种果实淀粉体形态结构及生理品质存在较大差异利用光学显微镜和电子显微镜比较分析了三个猕猴桃品种的淀粉体结构,并测定猕猴桃果肉的淀粉含量及猕猴桃糖酸,结果发现:（1）淀粉体呈类球体、扁球体,多面体结构类型。猕猴桃果肉淀粉体可以向有色体分化,契合质体的分化模式,为今后研究猕猴桃质体分化提供了很好的材料和方向;（2）HWD果肉细胞中淀粉体呈现多个淀粉体黏结的形态,而JG和HY呈分散的状态,HWD淀粉体的黏结形态可能是延缓降解的重要原因;（3）JG和HY的淀粉含量要高于HWD,而JG和HY的差异较小;HY和JG的果实硬度高于海沃德,说明果实硬度与淀粉含量相关;（4）猕猴桃柠檬酸含量大于奎宁酸大于苹果酸,HWD的奎宁酸含量随着发育成熟逐渐增加。2、建立了一种分离和提纯猕猴桃果实淀粉体的方法利用Percoll原液配制的密度梯度分离液,成功从不同时期的猕猴桃果肉中分离提纯高纯度和高完整度的淀粉体。利用光学和电子显微镜观察结果初步判定分离的到的淀粉体具有较好的完整性,猕猴桃果实淀粉体由单个淀粉颗粒组成,其直径大小约为2-10μm,Western杂交实验表明本实验分离提纯的淀粉体没有受到胞质、线粒体和液泡的污染,表明分离提纯淀粉体的纯度较高。3、淀粉代谢途径中关键的限速酶淀粉体蛋白经二级质谱分析,一共鉴定到了2397个蛋白。其中有质体定位的蛋白有1454个,将淀粉体蛋白功能归为17类,参与碳水化合物代谢途径的蛋白数量有124个。参与果实淀粉代谢途径差异蛋白总体表达的模式存在几种类型:上升型、下降型及先上升后下降型。在S1～S5时期HWD猕猴桃果实GWD和PWD没有上调表达,而在JG和HY猕猴桃果实有明显的上调表达,GWD和PWD是淀粉降解途径中关键的限速酶。总体来说本实验研究解释了淀粉体代谢关键蛋白酶的表达,为今后研究猕猴桃淀粉体代谢提供了重要的线索。
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