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目的:肌成纤维细胞(Myofibroblast,MFBs)活化是促进放射性肺纤维化(Radiation-induced pulmonary fibrosis,RIPF)发展的关键因素。本研究应用体内外模型,观察雷公藤内酯醇(Triptolide,TPL)对促MFBs活化的两大要素—转化生长因子(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)及基质硬化的调节作用,探讨TPL抑制RIPF中MFBs活化的相关机制,为TPL的抗RIPF应用提供有力支撑。方法:(1)C57BL/6小鼠全肺照射(15Gy)形成RIPF模型,TPL 0.25 mg/kg给药1个月;(2)ELISA方法检测活性因子TGF-β1及基质硬化相关因子:I型胶原蛋白(Type I Collagen,Col I)、Lysyl oxidase(LOX)、Lysyl oxidase–like-1(LOXL-1)、Lysyl oxidase–like-2(LOXL-2)等的水平;(3)采用TGF-β1刺激纤维细胞,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)、ERK、Smad3(ser208)、Smad3(ser423)等的水平,并采用RNA干扰技术,判断ERK及Smad3在TGF-β1促MFBs活化中的地位;(4)采用旋转流变仪检测Col I凝胶及肺组织硬度,高内涵免疫荧光成像分析比较软基质与硬基质对纤维细胞活化为MFBs(α-SMA+)的不同影响,Western blot及免疫荧光法检测integrinβ1、FAK、MYPT1表达水平,了解基质硬化促MFB活化的相关信号通路FAK/ROCK的活化水平;(5)观察TPL对体内外TGF-β1、基质硬化促MFB活化作用的影响,以及对相应信号通路的分别调节作用。结果:(1)TPL的抗放射性肺纤维化作用与抑制TGF-β1/ERK/Smad3途径、减少MFBs活化相关。TGF-β1刺激可上调p-ERK、p-Smad3(ser208)及p-Smad3(ser423)的水平,诱导MFB活化(α-SMA表达增加);使用ERK si RNA则可下调p-Smad3(ser208)水平,而对p-Smad3(ser423)无明显影响,显示ERK通过磷酸化Smad3(ser 208)参与了TGF-β1相关的MFBs活化。TPL对体内外p-ERK、p-Smad3(ser208)及p-Smad3(ser423)水平均有显著下调作用,证实了TPL通过抑制TGF-β1下游的Smad3经典活化(ser423磷酸化)和旁路活化(ERK引起ser208磷酸化),强效阻止TGF-β1相关的MFBs活化。(2)TPL可缓解RIPF中肺基质的硬化,并通过抑制FAK/ROCK信号通路减少MFB活化。在照射后肺组织中,过多的Col I,LOX,LOXL-2是推动基质硬化的主要因素。硬基质上调p-FAK、p-MYPT1的水平进而促MFBs活化。TPL一方面可减少Col I及LOXL-2的分泌量,下调RIPF中肺基质的硬度,另一方面,TPL可降低p FAK/FAK及p MYPT1/MYPT1的水平,抑制FAK-ROCK信号通路的激活,阻止基质硬化相关的MFBs活化。结论:TPL的强效抗RIPF作用与其多靶点抑制纤维化核心效应细胞—MFBs有关。TPL对促MFBs活化的两大要素—TGF-β1及基质硬化均具有抑制作用,可抑制TGF-β1/ERK/Smad3通路,并缓解基质硬化、抑制FAK/ROCK通路。本研究结果揭示TPL抗RIPF的关键机制,为TPL的实用提供理论基础。