【摘 要】
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甘蔗梢腐病是世界范围内重要的经济作物真菌性病害,其病原真菌为轮枝镰孢菌(F. verticillioides)和层出镰刀菌(F. proliferatum)。通过农杆菌介导的遗传转化分别构建了这两个
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甘蔗梢腐病是世界范围内重要的经济作物真菌性病害,其病原真菌为轮枝镰孢菌(F. verticillioides)和层出镰刀菌(F. proliferatum)。通过农杆菌介导的遗传转化分别构建了这两个镰刀菌种(菌株CNO-1和YN41)的突变体库,并利用高效TAIL-PCR和菌落形态对突变体库进行鉴定。结果分别构建了库容量为195的YN41突变体库和库容量为956的CNO-1突变体库。从两个突变体库中分别随机挑选6个转化子,进行PCR鉴定,结果均为阳性。通过菌落特征和致病性筛选YN41和CNO-1突变体库,鉴定出生长速度减慢且致病力下降突变体1个(A5),生长速度减慢且致病力不变突变体1个(C8),生长速度加快且致病力增强突变体2个(A1、A2),菌丝变浓密且菌丝疏水性变弱突变体1个(A3)；采用高效TAIL-PCR对这些转化子的T-DNA侧翼序列进行扩增,获得了A1、A2、A3突变体的T-DNA侧翼序列,通过BLAST鉴定到其插入位点(下游)基因,这些基因分别与色氨酸加氧酶和苯丙氨酸解氨酶等有关。CNO-1突变体库中,筛选出生长速度减慢突变体23个,色素变异突变体1个；对47株突变体进行高效TAIL-PCR,扩增插入位点侧翼序列,得到有效序列22条,BLAST结果显示,T-DNA的22个插入位点分布在CNO-1的15条基因组scaffold上；对插入位点(下游)基因进行分析,结果显示,生长速度减慢突变体的插入失活基因分别与细胞分裂、DNA修复、△12脂肪酸脱氢酶、E3泛素连接酶等有关。
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