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目的探讨腺病毒介导的sh RNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome Ten,PTEN）表达对体外培养的活化肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSC）骨架蛋白肌动蛋白（actin）及纽蛋白（vinculin）的影响。方法通过反复感染293A细胞的方法扩增携带靶向PTEN的RNA干扰序列[短发夹RNA（short hairpin RNA,sh RNA）]并表达绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的重组腺病毒Ad-sh RNA/PTEN及仅表达GFP的对照空病毒Ad-GFP,并测定其滴度;体外培养活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6,以腺病毒为载体将靶向PTEN的sh RNA瞬时转染活化HSC;采用Western blot及实时荧光定量PCR技术检测HSC的PTEN蛋白及m RNA表达;借助激光扫描共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope,LSCM）,应用四甲基异硫氰酸罗丹明（Tetramethylrhodamine isothiocyanate,TRITC）标记的鬼笔环肽检测HSC的形态、actin的分布、纤维状肌动蛋白（filamentous actin,F-actin）的荧光强度、伪足以及应力纤维的变化,采用免疫荧光法检测HSC的vinculin变化,并采用钙荧光探针Rhod-2/AM负载检测HSC内钙离子(Ca2+)浓度变化。采用SPSS17.0软件进行统计学处理,计量资料以均数±标准差（?）表示,多组间均数比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）,组间比较采用LSD检验,P<0.05即认为差异有统计学意义。实验分组:（1）Control组:在腺病毒转染步骤以DMEM代替腺病毒液;（2）Ad-GFP组:转染仅表达GFP的对照空病毒Ad-GFP;（3）Ad-sh RNA/PTEN组:转染重组腺病毒Ad-sh RNA/PTEN。结果1通过反复感染293A细胞的方法,获得实验所需腺病毒Ad-GFP、Ad-sh RNA/PTEN,滴度分别为1.6′109pfu/m L、1.3′109pfu/m L。2将腺病毒以感染倍数（multiplicity of infection,MOI）100感染体外活化HSC,感染48 h计数GFP阳性表达细胞数,测得Ad-GFP、Ad-sh RNA/PTEN转染效率均大于80%。3腺病毒感染HSC 48 h,应用实时荧光定量PCR技术检测各组HSC的PTEN m RNA表达,以Control组PTEN的m RNA表达量为1,则Ad-GFP组及Ad-sh RNA/PTEN组的PTEN m RNA相对Control组的表达倍数分别为0.92倍、0.64倍,Ad-sh RNA/PTEN组PTEN m RNA表达量明显低于Control组及Ad-GFP组（P<0.05）,而Control组与Ad-GFP组之间差异无统计学意义（P>0.05）。应用Western blot法检测HSC的PTEN蛋白表达,Ad-sh RNA/PTEN组（1.088±0.036）明显低于Control组（1.438±0.038）及Ad-GFP组（1.413±0.058）,P<0.05,而Control组与Ad-GFP组之间差异无统计学意义（P>0.05）。4 TRITC标记的鬼笔环肽检测显示:Control组与Ad-GFP组HSC内可见应力纤维,纤维丝短而稀疏,排列不规则,很少伪足形成;转染携带靶向PTEN的sh RNA的重组腺病毒48 h,可见HSC呈星形向四周伸展,actin排列紧密规则,数量增多,伪足充分向外伸展,应力纤维增长增粗。Ad-sh RNA/PTEN组F-actin的荧光强度（1146.10±28.57）较Control组（393.49±21.72）及Ad-GFP组（380.11±19.29）显著增强（P<0.05）,而Control组与Ad-GFP组之间差异无统计学意义（P>0.05）。5钙荧光探针Rhod-2/AM检测HSC内Ca2+浓度显示:Ad-sh RNA/PTEN组（1363.63±26.06）较Control组（334.62±16.97）及Ad-GFP组（348.05±19.99）明显增强（P<0.05）,而Control组与Ad-GFP组之间差异无统计学意义（P>0.05）。6免疫荧光法检测HSC的vinculin表达显示:Ad-sh RNA/PTEN组（770.77±20.12）较Control组（381.13±9.12）及Ad-GFP组（383.87±12.15）显著增强（P<0.05）,而Control组与Ad-GFP组之间差异无统计学意义（P>0.05）。结论1 PTEN表达下调可明显促进体外活化肝星状细胞骨架蛋白actin的形成及细胞骨架的重构。2 PTEN表达下调可显著增加活化肝星状细胞内钙离子浓度。3 PTEN表达下调可显著上调活化HSC的vinculin表达。