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选择白桦优树,建立高频率的再生体系,在此基础上,通过基因工程技术将有关改良材质的纤维素合成前体——尿苷二磷酸葡萄糖代谢有关的尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(UDP-glucose pyrophosphorylase,细菌来源的缩为UGPase,植物来源的缩为UGPA)和木质素合成相关的4-香豆酸:CoA连接酶(4-coumarate:CoA ligase,4CL)导入到白桦体内,通过目的基因的表达得到降低木质素含量和提高纤维素含量的造纸原料,是本论文研究的目的。 建立高频的再生体系是遗传转化的基础。本实验探讨了不同种类的激素及不同浓度的激素组合,不同的基础培养基对白桦叶片再生体系的影响,优化了白桦的再生系统: 1.得到高频率的白桦叶片再生培养基,再生频率达90%以上,再生的不定芽多,平均再生芽数高,最少也可以保证每片再生出6丛芽点。 K6:MS+BA 5.0 mg/l+KT0.5-1.0 mg/l+suc30 g/l+agar5.8 g/l N2:MS+BA3.0-5.0 mg/l+NAA0.5mg/l+suc30 g/l+agar5.8 g/l 2.确定白桦试管苗的最佳生根培养基,可保证生根率达80%以上。 1/2MS+NAA0.2 mg/l+suc20 g/l+agar5.8 g/l 1/2MS+IBA0.3-0.5 mg/l+suc20 g/l+agar5.8 g/1 3.确定白桦的继代扩繁培养基,保证平均每个植株可再生5-8个嫩枝的扩繁系数。 NT+BA0.2+IAA0.1+suc20g/l+agar5.8g/l 将植物紫穗槐(Amorpha Fruticosa)来源的4CL和UGPA基因和木醋酸菌(Acetobacter Xylinum)来源的UGPase基因通过农杆菌介导法导入到模式植物——烟草中,通过PCR和Southern Blotting等系列实验进行检测,结果证明,目的基因已完全整合到了烟草的染色体上,为目的基因的导入白桦奠定了基础。 建立白桦的转化体系,确定采用7mg/L的潮霉素和10mg/L的卡那霉素为最佳的抗生素筛选浓度,采用抑菌剂头孢霉素在400mg/L为最佳的抑菌浓度,添加100μmol/L的乙酰丁香酮可使转化率提高3倍。 在加入100μmol/L乙酰丁香酮转化目的基因的转化实验中,经卡那霉素50mg/l和潮霉素15mg/l的抗生素浓度的筛选后,得到抗性芽诱导率为6.5%。