单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogens，LM，简称为单增李斯特氏菌）是李斯特菌属中主要致病菌，生命力顽强，生长温度范围较广，可以广泛存在于自然界，是最致命的食源性病原体之一。食用被该菌污染的食物可以导致人和动物脑膜炎、流产、败血症等，病死率高达20%-30%。世界各地每年均有报道由该菌爆发引起的食品安全事件，我国进出口每年也发生多起从国外引进的食物被检出该菌而将其退回的事例。因食品中存在大量微生物，该菌在食品中的量也较小，故而检出该菌存在一些困难，该菌的检测、鉴定以及防控技术一直受到极大的关注。因此建立可靠的快速检测方法，对食品中单增李斯特氏菌的主动监测和污染控制刻不容缓。目前我国检测该菌的方法一直沿用传统的分离鉴定方法，操作复杂，用时较长，已不能适应现代快速检测的要求，需要开发更好更快的检测方法。环介导等温扩增技术（Loop-mediatedisothermal amplification, LAMP）是近年来发展出来的一种新颖的核酸体外等温扩增技术，具有简单、快速、特异性强、高度敏感的特点，已经应用于病原菌检测、转基因食品检测、医学应用等诸多领域。本试验将荧光与环介导等温扩增技术结合到一起，利用新型仪器——实时荧光监测仪实时监测产物扩增情况，这台仪器可以与电脑相连，将LAMP扩增情况数据化，作出相应的图以供查看，该方法被称为实时荧光环节导等温扩增技术（Real-TimeFluorescence Loop Mediated Isothermal Amplification，简称为RTF-LAMP）。本研究采用单增李斯特氏菌的inl B基因为试验靶基因设计并筛选出一对特异性引物，利用实时荧光监测仪62℃孵育反应60min对单增李斯特氏菌进行检测。最终确定的RTF-LAMP的反应体系为：反应内引物FIP和BIP各3.5μmol/L，反应内引物F3和B3各0.5μmol/L，其它反应组分分别为：3mM dNTPs，1mM MgCl2，2.5μL10×Bst聚合酶酶缓冲液，1μL800U BstDNA聚合酶，1μL模板DNA，甜菜碱0.5mmol/L，1:400荧光染料0.5μL，纯水补足体积到25μL。本研究以3株单增李斯特氏菌和17株非单增李斯特氏菌作为试验菌株进行RTF-LAMP试验的引物特异性验证，发现阳性结果均为单增李斯特氏菌株，而其他的非单增李斯特氏菌株结果均显示为阴性，由此证明试验所设计的引物特异性良好，可用于该菌的检测。本试验设计将单增李斯特氏菌人工污染熏肉并测定其检出限为35CFU/g。本研究还对反应的灵敏度进行了研究，结果表明，对单增李斯特氏菌纯培养物的检测灵敏度可以达到11CFU/mL，与普通LAMP相比，其灵敏度要高出10倍，而与PCR的方法比较，其灵敏度高出104倍。本研究所建立的RTF-LAMP方法能够直接对样品中的单增李斯特氏菌进行检测，大约1h即可完成，该方法用时短，操作简单，还可以极大的防止污染的发生。为快速检测食品中单增李斯特氏菌构建了一个技术平台。