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动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种慢性血管炎症,AS斑块的破裂可导致心肌梗死、脑梗死等临床心血管事件的发生。血管粘附蛋白-1(vascular adhesion protein-1,VAP-1)是一种具有胺氧化酶活性的粘附分子,也被称作氨基脲敏感性胺氧化酶(semicarbazide-sensitive amine oxidase,SSAO),主要表达在血管内皮细胞、平滑肌细胞和脂肪细胞。膜结合的VAP-1可被基质金属蛋白酶(MMP)酶切成可溶性的分子释放入血液中。这些可溶性的VAP-1仍具有胺氧化酶活力,介导炎细胞的迁移浸润。临床研究发现血清中SSAO的活性与颈动脉粥样硬化的斑块大小成正相关。然而,利用氨基脲灭活LDLr基因敲除小鼠体内VAP-1却促进斑块增大。有趣的是,这些增大的斑块含有更多的VSMCs和胶原,提示灭活VAP-1可稳定动脉粥样硬化斑块。这一作用可能与VAP-1抑制VSMCs表型转换有关。目的:构建VAP-1基因敲除型(knockout,KO)小鼠并建立动脉粥样硬化模型,探究VAP-1在动脉粥样硬化发生发展中的作用。方法:利用Cas9技术致使小鼠VAP-1基因的编码序列(Coding sequence,CDS)发生移码突变,以敲除该基因。应用基因扩增、Western blot技术对KO小鼠进行基因水平和蛋白水平的表达鉴定。随后将VAP-1 KO小鼠回交到LDLr KO小鼠背景上,得到双基因KO(doubleKO,dKO)小鼠。通过喂食小鼠6/9周的高脂饲料,诱导早期和晚期动脉粥样硬化病灶的形成。利用组织染色技术,免疫组化技术检测VAP-1对病灶发展和斑块稳定性的影响。应用流式细胞技术,免疫荧光化学法探究VAP-1对VSMCs表型转换的影响。结果:VAP-1缺失不影响血清总胆固醇水平。与LDLr KO小鼠相比,高脂饲料喂食的LDLr/VAP-1dKO小鼠体内形成了更大的早期病灶(1.5倍,p<0.01)。然而,VAP-1的缺失并不影响晚期病灶的大小;对病灶成分的分析发现,dKO小鼠血管内斑块含有减少的巨噬细胞和增多的胶原沉积(巨噬细胞:0.80-fold,p<0.05(6W-WTD),/0.74-fold,p<0.001(9W-WTD);胶原:1.4-fold,p<0.01(6W-WTD)/1.4-fold,p<0.01(9W-WTD));值得注意的是,dKO小鼠晚期病灶的纤维帽增厚且坏死核含量不变。这些变化提示VAP-1的缺失可增强斑块的稳定性。dKO小鼠外周血中Ly6Chigh的单核细胞数量减少,这可能是病灶中巨噬细胞减少的原因。而动脉粥样硬化斑块中增多的胶原主要来源于分泌胶原的SMCs含量的增加(SMCs:1.3-fold,p<0.01(6W-WTD)/1.5-fold,p<0.001(9W-WTD))。VAP-1 的缺失还增加了斑块中 Ki67 阳性增殖 SMCs 的数量(1.6-fold,p<0.05(6W-WTD)/1.4-fold,p<0.01(9W-WTD))。这些结果提示,VAP-1的缺失有助于VSMCs向合成型转变。结论:VAP-1的缺失可以促进斑块中SMCs向合成表型转变。这种转变使病灶中胶原蛋白的含量增加,纤维帽变厚,从而增加了斑块的稳定性。因此,VAP-1有望成为治疗动脉粥样硬化的新靶点。