前言 骨髓基质细胞(marrow stromal cell，MSC)是一种非造血干细胞，又称间充质干细胞(mesenchymal stem cell)，具有自我更新的能力和多向分化的潜能。如果置于不同的微环境中，骨髓基质细胞可分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞等。最新研究表明，将一定数量的骨髓基质细胞通过脑立体定向术、静脉或颈内动脉注射移植到脑内后，能够明显改善局灶性脑梗死动物的神经行为功能，部分进入脑内的骨髓基质细胞有向神经细胞分化的倾向，神经元标志物NeuN及星形胶质细胞标志物GFAP表达阳性。骨髓基质细胞能够通过血脑屏障并在前脑及小脑中迁移，尤其优先进入损伤侧脑组织中。 以上研究表明，骨髓基质细胞移植治疗脑梗死是一种很有前景的治疗手段，并且有必要进行更深一步的研究。目前的研究焦点已集中到骨髓基质细胞促进神经功能恢复的具体机制和影响因素方面。 本课题首先在体外分离、培养大鼠骨髓基质细胞，了解其生长特性以及原代培养的条件，并在体外加以鉴定，为骨髓基质细胞移植治疗脑梗死提供细胞准备。在此基础上，应用静脉移植的方法将骨髓基质细胞植入大鼠脑梗死动物模型，对该治疗方法促进神经功能恢复的机制进行初步研究。 材料和方法 本实验分为两个部分： 第一部分 大鼠骨髓基质细胞的体外分离、培养和鉴定 取Wistar大鼠骨髓，分离培养骨髓基质细胞，相差显微镜下观察其形态，传代后观察其生长特性，用免疫组化方法加以鉴定。骨髓基质细胞具有贴壁生长特性，较易对其进行分离扩增，原代培养20天后可分离得到骨髓基质细胞，在5代以前生长形态相对稳定，典型的骨髓基质细胞可分为两种类型： Ⅰ型：胞体呈梭形，体积小，数量相对少。 n型:为主要类型，体积大，扁平形，细胞间形态差异较大，立体感不强，胞浆淡染。 第二部分经静脉移植骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑梗死Bcl一蛋白表达的实验研究 将实验大鼠24只分为3组，第1组(n二8)单纯大脑中动脉闭塞(MCAO)组;第2组(n=8)，MCAO后48小时经尾静脉注射生理盐水1毫升;第3组(n=8)，MeAo后45小时经尾静脉注射1 x 107个MSCs。神经功能严重程度评分日一次进行。所有动物均在MCAO后8天处死。免疫组织化学染色显示鼠脑内Bd一蛋白表达情况。结果与对照组相比，实验组大鼠的神经功能严重程度评分有明显改善(P<0.001)，且脑内Bel一蛋白表达增加(P<0.001)。结论 MSCs对脑梗死的神经保护作用是多方面的，通过促进脑内Bcl一2蛋白表达、抑制凋亡可能是其机制之一。