中药联合益生菌对鸡源大肠杆菌致小鼠腹泻保护作用及机理研究

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本试验从延边不同鸡场采集样本分离大肠杆菌、沙门氏菌,进行革兰氏染色、生化及血清学鉴定,采用致死性试验分析致病性;应用牛津杯法、连续稀释法及正交试验设计等分析中药、益生菌及致病菌间的相互作用。用致病性最强的大肠杆菌分离株建立小鼠腹泻模型,分空白组、模型组、中药组、益生菌组及中药联合益生菌组,处理期间每天灌胃前称量体重、饮食量,灌胃后连续观察4 h,记录临床症状、死亡率、腹泻率、治愈率、腹泻指数及稀便级等,3d后称体重、饮食量并采集病料,眼球取血用于血液学分析,剖检眼观各脏器状况,取脏器称重,计算心、肺、脾、肝、肾指数,无菌收集肠内容物进行细菌计数,取适量粪便做隐血检测,取小肠组织HE染色、免疫组织化学染色及扫描电镜分析肠组织病理组织学、NF-κB p65蛋白表达及超微结构变化,检测血清、小肠匀浆MPO、TNF-α、IL-6及IL-1β含量,RT-PCR法检测血液及小肠组织TNF-α、IL-6 mRNA表达。本试验成功分离鸡源致病性大肠杆菌28株、沙门氏菌25株,致病性最强的大肠杆菌分离株为D4-粪。蒲公英粗提物对分离菌株呈剂量依赖的抑菌作用;黄芪总黄酮抑制枯草杆菌、大肠杆菌标准菌株及分离株,对沙门氏菌分离株的影响均不稳定;黄芪多糖能抑制所有供试菌株;枯草杆菌对分离株均有抑制作用;正交试验结果显示抑制大肠杆菌分离株D4-粪效果最佳的各因素配比为A1B2C2D2。本试验成功建立小鼠细菌性腹泻模型进而研究相关机制,模型组小鼠与空白组相比极度沉郁、腹泻率100%,剖检脏器有明显病变;其他组各方面均有不同程度好转。中药组、益生菌组、中药联合益生菌组可改善模型组腹泻指数、饮食量、体重、血液学指标的病变,中药联合益生菌组效果最好。与模型组的肝脏、脾脏脏器指数相比中药组能显著性下调(P<0.05),中药联合益生菌组能极显著性下调(P<0.01)。粪便隐血检测及肠内容物细菌计数结果显示中药联合益生菌组可明显改进小鼠的腹泻。模型组小肠组织及血清MPO、TNF-α、IL-6、IL-1β含量和小肠组织NF-κB p65蛋白的高表达,仅中药联合益生菌组呈显著性降低(P<0.05)。模型组的病理组织学病变,包括小肠绒毛脱落严重、肠腺显著变性、黏膜炎性细胞大量浸润,中药组、益生菌组、中药联合益生菌组均可不同程度转归,中药联合益生菌组恢复最好。扫描电镜结果显示模型组小肠绒毛高度脱水萎缩、损伤严重,微绒毛脱落明显的现象,中药组及益生菌组仅能改善,中药联合益生菌组可高度修复。RT-PCR结果显示模型组血液、小肠组织中TNF-α及IL-6 mRNA呈高度表达,中药联合益生菌组可明显降低,呈显著性差异(P<0.05)。综上试验结果表明,中药联合益生菌通过调控细菌性腹泻小鼠NF-κB通路,抑制小肠组织NF-κB p65蛋白的高度表达,降低血液及小肠组织TNF-α、IL-6 mRNA的过度转录,下调血清及小肠组织TNF-α、IL-6、IL-1β升高的含量,改善机体的各项指标,从而起到保护细菌性腹泻小鼠的作用。
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