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第一部分 DADS启动HL-60细胞凋亡模型的建立与鉴定 目的:寻找二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点,建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型。 方法:实验设未处理组、处理组和撤药组,分别采用倒置显微镜和普通光学显微镜观察、细胞计数、流式细胞术、DNA凝胶电泳、western blot等方法,进行细胞形态学观察,绘制生长曲线,检测凋亡率、活化的caspase-3以及DNA Ladder、凋亡相关蛋白的检测。 结果:3.6mg L-1DADS作用HL-60细胞2d-6d,细胞数分别比对照组减少24.1%、36.5%、44.2%、52%、53.6%。处理后,细胞核浓缩,染色质边聚,可见凋亡小体。DADS作用1d、2d,凋亡率分别为3.1%、4.3%,与对照组(3.0%)无显著性差异,而作用3d、4d、5d的凋亡率分别达到8.5%,15.2%,27.4%,均高于对照组(P<0.05)。DADS作用2d-5d撤药后再培养至第6d,凋亡率分别为7.9%,12.4%,16.5%,18.8%,高于对照组的3.3%(P<0.05)。处理2d-5d后,活化的caspase-3的表达率为10.0%,10.4%,14.9%,17.3%,均高于对照组5.4%(P<0.05)。DNA凝胶电泳显示,处理组4d后出现明显梯状条带,而撤药组从2d-5d撤药均出现明显梯状条带。western blot结果表明,caspase-3从作用2d起开始表达上调,而Bcl-2从2d起表达开始下调。 结论:1.DADS可诱导人白血病HL-60细胞凋亡。 2.DADS诱导HL-60细胞凋亡的启动点为3.6mg·L-1DADS处理2d。