具有结合胆酸盐作用卵形鲳鲹蛋白酶解物的制备及分离纯化研究

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在发达国家和发展中国家中,动脉粥样硬化等心血管疾病是导致死亡的主要原因。血脂异常的直接危害就是引起动脉粥样硬化。调节异常的血脂被看成是心血管疾病初级防预和二级防预的基础,并能显著降低由心血管疾病导致死亡的危险性。目前临床上使用的化学类降血脂药物虽然疗效显著,但副作用大,停药后复发率高。但是,与胆酸盐吸附作用的降脂药物有相同作用的生物活性肽,因其无副作用等优点,具有研发其作为降血脂胆酸螯合剂药物替代品的明显潜力。  本论文创新性地从卵形鲳鲹酶解制备具有体外结合胆酸盐能力的蛋白肽,以期开发其辅助降血脂功能。本文首次详细研究制备具有体外结合胆酸盐能力的卵形鲳鲹蛋白肽的最佳酶解工艺条件,并对其进行分离纯化及表征。主要结果如下:  1.卵形鲳鲹肌肉中粗蛋白含量为19.3%,含有18种氨基酸,其中8种为人体必需氨基酸,其疏水氨基酸含量较高(43.2%)提示卵形鲳鲹蛋白可能具有良好的胆酸盐结合作用,其较低浓度的Met水平(1.65)和低Met/Gly比值(0.477)也提示卵形鲳鲹蛋白可能具有良好的降低血清总胆固醇水平的效果。同时,其危害物含量远低于标准值。因此,卵形鲳鲹营养均衡,安全性高。  2.以酶解产物与胆酸盐的体外结合率为指标,从5种常用食品用蛋白酶中筛选出胰蛋白酶为最优蛋白酶。经单因素-正交法优化酶解条件,获得最佳工艺条件为:酶解时间2h、加酶量2000 U·g-1、料液比1∶4(pH8、37℃)。在该条件下,酶解产物(20 mg·mL-1)对甘氨胆酸钠体外结合效果相当于同浓度阳性对照物(考来烯胺散)的48.26%。  3.经GPC法分析,酶解产物中相对分子量3000Da以下的肽类组分占总蛋白水解物的77.30%。经超滤膜分离后,相对分子量小于3000Da的肽组分体外结合胆酸盐效果优于其他组分,对甘氨胆酸钠体外结合效果也提高到到同浓度阳性对照物(考来烯胺散)的77.97%。利用RP-HPLC和MALDI-TOF-MS对其进行初步的纯化和表征,结果显示,小分子肽组分的质谱信号峰均小于1000m/z。
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