【摘 要】
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肥胖状态下脂肪组织内的脂肪细胞过度增殖和分化,诱导巨噬细胞浸润增多,炎症因子不断增加,从而引发慢性炎症。研究表明许多基因和micro RNAs参与了该过程的调控,但目前对于肥胖诱导的脂肪组织慢性炎症发生的具体机制仍不完全清楚。本研究将构建的FSTL1过表达载体pc DNA3.1-FSTL1及人工合成的si RNAs转染小鼠皮下前脂肪细胞,通过油红O染色检测脂滴聚集情况和甘油三酯含量,并结合q PC
【基金项目】
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国家自然科学基金（U19A2036,31530073和31772576）；
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肥胖状态下脂肪组织内的脂肪细胞过度增殖和分化,诱导巨噬细胞浸润增多,炎症因子不断增加,从而引发慢性炎症。研究表明许多基因和micro RNAs参与了该过程的调控,但目前对于肥胖诱导的脂肪组织慢性炎症发生的具体机制仍不完全清楚。本研究将构建的FSTL1过表达载体pc DNA3.1-FSTL1及人工合成的si RNAs转染小鼠皮下前脂肪细胞,通过油红O染色检测脂滴聚集情况和甘油三酯含量,并结合q PCR和Western blotting技术检测成脂分化相关基因和炎症基因的mRNA和蛋白表达水平的变化。通过软件预测及双荧光素酶报告系统检测靶向FSTL1的miRNA,并通过向小鼠皮下前脂肪细胞内转染miRNA Mimic和Inhibitor进一步探究miRNA与FSTL1调控脂肪分化和炎症的具体作用机制。此外,通过建立小鼠皮下前脂肪细胞与骨髓来源巨噬细胞的直接共培养体系,以期深入探究脂肪分化与炎症发生的相互关系,为治疗肥胖等代谢性疾病及改善动物生产性能奠定一定理论基础。本研究主要结果如下:（1）成功分离培养了小鼠皮下前脂肪细胞,油红O染色显示脂滴聚集明显,细胞分化能力较强。（2）过表达FSTL1显著抑制脂滴生成,小鼠皮下前脂肪细胞中脂肪分化关键基因PPARγ、FABP4的mRNA表达水平和FABP4的蛋白水平显著下降（P＜0.05,P＜0.01）,但炎症基因IL-1β、CCL2的mRNA表达水平和IL-1β的蛋白水平显著上升（P＜0.05,P＜0.01）;反之,通过si RNAs抑制FSTL1的表达,则会促进小鼠皮下前脂肪细胞分化,抑制炎症因子的表达。（3）软件预测和双荧光素酶报告系统结果显示,miR-125a-3p可以靶向作用于FSTL1并显著下调其相对荧光素酶活性（P＜0.01）;过表达miR-125a-3p显著抑制FSTL1基因的mRNA和蛋白表达水平,而抑制miR-125a-3p的表达则明显上调FSTL1的mRNA和蛋白表达水平（P＜0.01）。（4）通过向小鼠皮下前脂肪细胞内转染miR-125a-3p Mimic和Inhibitor,发现过表达miR-125a-3p促进脂肪分化基因PPARγ、FABP4的mRNA以及FABP4蛋白的表达（P＜0.05,P＜0.01）,而炎症基因IL-1β、CCL2的mRNA和IL-1β的蛋白水平呈现显著下调（P＜0.01）;相反,抑制miR-125a-3p的表达则阻碍成脂分化过程,促进炎症基因的表达。（5）成功建立了小鼠皮下前脂肪细胞和骨髓来源巨噬细胞的直接共培养体系;共培养条件下,分化的小鼠皮下前脂肪细胞可诱导骨髓来源巨噬细胞炎性因子IL-1β和i NOS的mRNA表达量极显著增加（P＜0.01）;反之,骨髓来源巨噬细胞吞噬成脂分化过程产生的脂滴,降低PPARγ和LPL的mRNA表达水平（P＜0.01）,抑制分化过程。综上,本研究证实了miR-125a-3p可以靶向FSTL1基因促进小鼠皮下前脂肪细胞分化并抑制炎症发生。
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