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蛋白质体外重折叠过程中聚集体的形成是制约蛋白质恢复正确空间结构的一个主要原因,向复性体系中加入能够协助目标蛋白复性的试剂,即折叠助剂,是解决这一问题的有效方法。聚N-异丙基丙烯酰胺(poly(N-isopropylacrylamide),PNIPAM)是目前广泛应用的一种温敏型聚合物,本文合成了线性PNIPAM,以溶菌酶(lysozyme)和重组人γ-干扰素(rhIFN-γ)包涵体为对象,研究了PNIPAM协助蛋白质体外复性的机理及作用。采用自由基聚合法,以偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)为单体,在乙醇溶液中合成了PNIPAM。温敏性能研究表明:其低临界溶解温度(LCST)约为32℃,该值受PNIPAM基团的亲水疏水相互作用强弱变化所控制,随PNIPAM分子量、溶液浓度和溶液组成不同而略有变化。以溶菌酶为模型蛋白考察了PNIPAM协助蛋白质复性的机理。从溶菌酶的结构和酶活上分析,PNIPAM具有较好协助溶菌酶复性的效果,与传统的稀释复性相比,PNIPAM可大大提高蛋白复性的初始浓度,在协助蛋白质复性上有较大优势。在溶菌酶浓度为600μg/mL时,活性回收率从稀释复性的11.93%显著提高到79.83%。系统考察了复性液中PNIPAM与溶菌酶浓度比(w/w)、尿素浓度和复性温度对溶菌酶复性效果的影响,确定本实验中合适的复性条件为,PNIPAM与溶菌酶浓度比8、尿素浓度1.8mol/L、复性温度30℃。综合复性过程中溶菌酶荧光发射光谱的变化,认为在复性过程中起主要作用的是PNIPAM的疏水基团异丙基与溶菌酶之间的疏水相互作用,这种作用阻止了蛋白折叠过程中的聚集沉淀,使复性向天然态的构象进行。在以上实验的基础上,对PNIPAM协助rhIFN-γ包涵体体外复性进行了探索性研究。重组E.coli发酵后,每升发酵液可得粗制rhIFN-γ包涵体约1.8克,经洗涤、溶解,rhIFN-γ的纯度达78%。对rhIFN-γ复性过程中的结构变化和最终的活性浓度分析,PNIPAM具有显著协助rhIFN-γ复性的效果,当初始rhIFN-γ浓度为50μg/mL时,复性后的活性rhIFN-γ浓度可达27μg/mL,而相同条件下,稀释复性只能达到5μg/mL。对rhIFN-γ而言,适宜的PNIPAM与rhIFN-γ的浓度比为20,复性温度为15℃。线性温敏型水凝胶PNIPAM是通过与变性蛋白的疏水相互作用来协助蛋白质进行体外重折叠复性,具有一定的通用性,是一种新型、高效而又低成本的复性添加剂,具有较好的工业应用前景。