本课题组在对怀山药α-葡萄糖苷酶抑制剂活性部位的研究中,首次从怀山药中分离得到反式N-p香豆酰酪胺(N-p-t-CT),因其具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶等多种生物活性而备受关注,其中α-葡萄糖苷酶抑制活性尤为显著。进一步的研究表明,该化合物水溶性差、其溶液在光照条件下容易发生顺反异构化反应,生成顺式N-p香豆酰酪胺(N-p-c-CT),从而极大降低其α-葡萄糖苷酶抑制活性。基于此,本文建立了测定怀山药中N-p-t-CT含量的高效液相色谱方法,测定了怀山药中N-p-t-CT的含量,考察了 N-p-t-CT顺反异构化现象,并通过化学修饰法和物理包裹法增加了N-p-t-C 在水中的溶解度。具体的研究内容主要包括以下四个方面:1.怀山药中N-p-t-CT的含量测定和顺反异构化现象以N-p-t-CT为指标,建立了测定不同干燥方式的怀山药不同部位中N-p-t-CT含量的高效液相色谱方法。结果表明,怀山药皮中的N-p-t-CT含量明显高于怀山药去皮块茎中的含量,不同干燥方式对怀山药中N-p-t-CT含量的影响不大,在光照条件下怀山药提取液中的N-p-t-CT发生顺反异构化反应,生成其顺式异构体N-p-c-CT使其含量降低。2.N-p-t-CT 的制备通过合成的方法制备N-p-t-CT。以对羟基苯甲醛和丙二酸为原料制备对羟基肉桂酸,然后以对羟基肉桂酸与对羟基苯乙胺反应得到目标产物N-p-t-CT,其结构经核磁氢谱(1HNMR)、质谱(MS)进行了表征,高效液相色谱(HPLC)测定结果显示产品纯度达到99%以上,为本课题后续的研究提供了足量的N-p-t-CT。3.N-p-t-CT的顺反异构化研究建立了分离N-p-t-CT和N-p-c-CT的高效液相色谱方法,分别考察了光源、溶剂、温度、浓度、溶液的pH值对N-p-t-CT顺反异构化程度的影响。结果表明,紫外光是诱导N-p-t-CT顺反异构化的主要因素;随着溶剂极性的减小,异构化程度降低;温度对N-p-t-CT没有影响;浓度越大异构化程度越低;溶液pH值越高异构化程度越低。因而N-p-t-CT在避光条件、小极性溶剂、高浓度、碱性条件下相对稳定。4.N-p-t-CT的增溶作用研究通过化学修饰,在N-P-t-CT的4’-羟基上引入聚乙二醇mPEG400增加其水溶性。先将聚乙二醇单甲醚在强碱的条件下磺酸酯化,同时用二碳酸二叔丁酯(BOC)对对羟基苯乙胺进行氨基保护,将上两步反应的产物在碱性(Cs2CO3)条件下反应,将mPEG400链与对羟基苯乙胺上的羟基结合,得到mPEG化的对羟基苯乙胺,然后在酸性条件下,脱去BOC的氨基保护,最后与对羟基肉桂酸反应得到最终产物。mPEG400的引入使反式N-p香豆酰酪胺水溶性增加了 238倍。用冷冻干燥法制备羟丙基-β-环糊精的N-p-t-CT的包合物,载药率为2.8%,包合率为18.2%。通过紫外可见光谱(UV-vis)、傅立叶变换红外光谱(FTIR)、X射线衍射(XRD)、1HNMR检测手段对包合物进行表征,证明包合物的形成。增溶作用结果显示:包合物的形成使N-p-t-CT的水溶性增加了 1461倍,α-葡萄糖苷酶抑制活性测定结果显示:包合前后抑制α-葡萄糖苷酶活性的IC50值分别为1.72±0.2μM和2.73±0.2μM,即包合物的形成既可以增加N-p-t-CT的水溶性又同时具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性。