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鸡减蛋综合征病毒(EDSV)是禽腺病毒Ⅲ群中唯一的成员。其宿主范围较广,毒株毒力差异较大,具有特殊的生物学特性。本试验以EDSV河北株、国际标准株(AV-127)、扬州株为基础材料,分别经鸭胚复壮增殖,测其血凝价,应用葡聚糖层析及PEG-6000浓缩的方法,对三株病毒的鸭胚尿囊液进行提纯,得到较为纯净的病毒样本。 应用SDS-PAGE对葡聚糖层析提纯后的3株病毒样本,进行病毒蛋白多肽分析,结果表明:河北株有13条多肽,AV-127有8条多肽,扬州株有10条多肽,病毒的多肽组成与各国学者已报到的略有差异。与国际标准株AV-127相比,EDSV河北株多了五条蛋白带,其中分子量为76.6KD的最为明显且含量较多。 3株病毒分离于不同地区,来源于不同宿主,用BamHⅠ、HindⅢ、EcoRⅠ、PstⅠ、SmaⅠ、PuvⅡ六种限制性内切酶(RE)对3株病毒的DNA进行单酶切,建立了单酶切图谱,并计算出了各酶切片段分子量的大小。单酶切图谱比较发现,河北株与AV-127酶切片段大小和数目差异不是很大,且SmaⅠ、EcoRⅠ和PuvⅡ的酶切图谱完全一样,河北株与扬州株的酶切图谱存有较大差异。同时以BamHⅠ的酶切为基础,分别与其它五种酶进行双酶切,建立双酶切图谱,EDSV河北株BamHⅠ+SmaⅠ、BamHⅠ+PstⅠ、BamHⅠ+EcoRⅠ、BamHⅠ+HindⅢ及BamHⅠ+PuvⅡ的酶切片段分别为6条、6条、9条、7条和5条。 参照GeneBank中的标准序列,利用Primer5.0软件设计一对引物,从EDSV河北株全基因组中扩增出pⅧ基因,并克隆到pBS-T载体的多克隆位点中,经感受态细胞转化后得到转化子,经PCR鉴定和酶切分析筛选重组阳性克隆。经测序及序列分析表明,所扩增、克隆的基因片段包括了EDSV pⅧ基因从起始密码子ATG到终止密码子TGA在内的完整序列。与国际标准株AV-127pⅧ基因相比,无突变位点,高度同源。与酶切分析的结果相结合来看,EDSV河北株与国际标准株AV-127可能为同一基因型。同时,与12株不同腺病毒pⅧ基因进行同源性比较后发现,EDSV河北株pⅧ基因与牛腺病毒-4型pⅧ基因同源性较其它腺病毒相对较高,达38.3%。