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目的:(1)了解长链非编码RNA H19在急性白血病患者中表达水平的变化,并分析其与患者预后的关系。(2)探讨H19基因CBS6位点的甲基化率与H19异常表达的杂合子中LOI发生频率的关系。(3)进一步了解H19在急性白血病细胞NB4中增殖、凋亡的作用,试图为急性白血病的诊断与治疗提供一个新的靶点。方法:(1)应用Real-time qPCR方法检测急性白血病患者及正常人H19的表达水平,比较患者与正常人之间H19的差异表达。(2)运用焦磷酸测序法,检测患者与正常人之间CBS6位点甲基化率,对比该位点甲基化率。(3)利用H19第5个外显子Rsa I位点的多态性,运用SNP测序的方法,在患者标本中筛选杂合子,再在杂合子标本中筛选出LOI及MOI标本,进一步对比二者间CBS6位点的甲基化率,推测LOI与该位点甲基化的关系。(4)应用Real-time qPCR方法筛选高表达H19的急性白血病细胞株。运用RNA干扰技术,构建pGV248-H19-RNAi-GFP、Puro慢病毒干扰载体,建立H19沉默的NB4稳定转染的细胞株模型。(5)采用CCK-8法绘制细胞生长曲线、增殖抑制曲线及克隆形成抑制实验检测H19沉默后NB4细胞株增殖变化情况。(6)采用苯并咪唑染料(bisbenzimide,Hoechst33258)染色法观察细胞凋亡形态、流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果:1、急性白血病患者H19表达明显高于正常人(P=0.0031)。2、通过检测DNA甲基化相关的甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B和DNMT1。发现患者DNMT3A、DNMT3B表达明显高于正常对照(P=0.0004,P<0.0001),而DNMT1与之相反(P=0.0142)。3、通过生存分析可知:高表达H19的患者OS及EFS明显低于低表达H19的患者,且其差异具有统计学意义(P=0.0351,P=0.0256)。4、急性白血病患者CBS6位点甲基化率低于正常对照,但差异并不明显(P=0.0163)。结合CBS6位点的甲基化率及筛选出的LOI、MOI标本,进一步分析可知,LOI患者的CBS6位点甲基化率明显低于MOI的患者(P=0.033)。5、通过构建RNA干扰载体,包装H19干扰慢病毒,成功构建稳定的H19干扰NB4细胞株。6、H19沉默的NB4细胞株较对照组增殖能力明显下降,凋亡率明显升高。结论:1、长链非编码RNA H19在急性白血病患者中存在异常高表达的现象,并且导致患者的不良预后,其可能作为癌基因影响急性白血病的发生与发展,并可能成为潜在的治疗靶点。2、急性白血病患者CBS6位点甲基化率低于正常人,并且以急性髓细胞细胞白血病为主,推测CBS6位点的甲基化率可能是LOI发生的机制之一。3、体外抑制H19表达,导致白血病细胞增殖受到明显抑制,且凋亡率明显升高,表明H19在急性白血病中可能为癌基因的作用,影响了急性白血病细胞的生物学特征。