肾间质纤维化时凋亡抑制蛋白Livin的表达

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目的:观察凋亡抑制蛋白Livin(Inhibitor of Apoptosis Proteins,IAPs,Livin)在肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)时的表达。方法:(1)不同剂量的转化生长因子TGF-β1(0、1、2、5及10ng/ml)作用于标准培养的肾小管上皮细胞(HK-2细胞)48小时,倒置相差显微镜下观察各浓度组HK-2细胞的形态学变化,Western blot实验检测各浓度组HK-2细胞Livin蛋白的表达趋势。(2)将24只CD1雄性小鼠随机平均分为对照组(ⅰ组)与单侧输尿管梗阻模型组(unilateral ureteral occlusion,UUO,ⅱ组),手术前1天ⅰ组、ⅱ组均给予等量生理盐水灌胃。术后14天摘取梗阻侧肾脏,切片分别行免疫组化实验检测E-钙粘蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-Sma)、Livin蛋白在肾脏的表达。结果:(1)TGF-β1刺激HK-2细胞后,倒置光学显微镜显示细胞形态从鹅卵石样向成纤维细胞转化,细胞变大、变梭,细胞间距明显增大;Western blot实验显示Livin蛋白在正常HK-2细胞中仅有少量表达,当TGF-β1诱导HK-2细胞发生肾间质纤维化时表达明显增加,且在TGF-β1作用剂量为2ng/ml、作用时间为48小时时表达最为显著,且各浓度组与TGF-β1作用剂量为0ng/ml,作用时间为48小时比较,Image-Pro Plus 6.0图像分析软件计算平均光密度值(累积光密度值/视野面积),P<0.001,差异极显著,均具有统计学意义。(2)免疫组化SP实验结果提示:与ⅰ组相比,ⅱ组肾组织中E-Cad表达减少,而α-Sma、Livin表达增加,先用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件计算平均光密度值,取均值后采用SPSS21.0统计学软件进行统计分析,P<0.05,差异有统计学意义。结论:凋亡抑制蛋白Livin与肾间质纤维化有关,但孰非因果有待更多试验探索。
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