论文部分内容阅读
目的：1、研究某三级甲等医院重症监护室(ICU)抗生素相关性腹泻(AAD)患者艰难梭菌检出情况,艰难梭菌毒素携带特征,同时使用多位点序列分型(MLST)、随机引物PCR分析(RAPD),了解本地区艰难梭菌的基因型别,主要流行菌株,并以MLST为参考,比较RAPD方法是否适合艰难梭菌分型。本研究数据可与国际上其他地区流行菌株进行比较并补充艰难梭菌MLST数据库。2、研究AAD患者中艰难梭菌相关性腹泻(CDAD)的构成比,CDAD患者在ICU住院患者的发病率,并通过多因素分析比较非艰难梭菌导致的AAD与CDAD患者在感染危险因素方面的差异。为临床治疗、预防、监测CDAD,并制定合理的防治方案提供数据支持。方法：对2013年6月-2014年2月期间,某院综合ICU、神经内科ICU、神经外科ICU、呼吸ICU发生AAD的患者取大便标本使用CDMN选择性培养基进行厌氧培养。通过常规培养+分子生物学技术鉴定艰难梭菌。随后对其A、B毒素基因tcdA、tcdB,二元毒素基因cdtA、cdtB进行扩增,了解毒素携带情况。对艰难梭菌7个管家基因进行扩增、测序,通过MLST数据库获得基因ST型,采用RAPD方法对艰难梭菌进行分型,cross checker得出矩阵,NTsys2.10e软件clustering功能分析得出的树状图。使用bionumerics软件对MLST和RAPD数据及艰难梭菌基本信息构建复合树状图,并进行两种方法的比对。以ICU患者住院日为分母,医疗机构发生的医院感染CDAD (HOHA CDAD)患者数为分子,得出CDAD发病率。通过填写艰难梭菌感染患者调查表,并使用Epidate录入数据,使用SPSS13.0对数据进行分析,对单因素计量资料采用t检验,计数资料采用卡方检验,对多因素采用Backward:LR法进行逐步Logistic回归分析。结果：1.从4个ICU的394例患者725份标本中共分离出40株艰难梭菌,其中32株来源于非重复患者标本,主要来自于综合ICU12株,神经内科ICU23株,神经外科ICU5株,呼吸ICU未检测到艰难梭菌。有25株检测出tcdA,33株检测出tcdB,艰难梭菌毒素A+B+菌株25株,占62.50%,A-B+菌株8株,占20.00%,A-B-菌株7株,占17.50%,未检测出A+B-菌株。检测到一株cdtA和cdtB基因阳性艰难梭菌。2.40株艰难梭菌经MLST分析共分为9个ST型,来源于3个clade,ST54(9株)、ST39(7株)、ST26(6株)、ST3(4株)、ST37(3株)、ST35(2株)、ST48(2株)、ST2(2株),ST17、ST201、ST33、ST133分别为1株,其中ST201, clade3为二元毒素阳性菌株。另外本研究中发现一株新的ST型别,经提交MLST数据核实为ST274。RAPD基因指纹图谱分型,共有27个型别,其中最常见的为R20型,共有5株,其次为R13型4株,R6有3株,其余型别均有1-2株。将RAPD旨纹图谱与ST型进行聚类分析,发现R20型对应的ST型别为ST26,R13对应ST54,R6对应ST37,由于存在单个条带的差异,ST39分布在R1-R5之间,而R1-R5相互之间是亚型的关系。3. HOHA CDAD发病率为16.60/10,000住院日,其中神内ICU的HOHA CDAD发病率为42.82/10,000住院日,CDAD占AAD患者构成比为8.12%(32/394)。4. CDAD与AAD中非CDAD患者对比,经单因素分析,过去一个月使用抗生素(贮值=12.30,P=0.00)、胃肠外营养(χ2值=4.72,P=0.03)、腹泻前住院天数(t=-2.12,P=0.03),腹泻前使用抗生素天数(t=-1.99,P=0.05)4个危险因素。经多因素Logistic回归分析,一月前使用抗生素,腹泻前的住院天数,是导致住院患者CDAD的危险因素。其中一月前使用抗生素对未使用抗生素导致CDAD的发病比数比例高达7.30倍,腹泻前住院天数每增加一个等级CDAD的发病比数比例为2.28。结论：1.本研究医院中艰难梭菌毒性携带特征以毒素A+B+为主；2.艰难梭菌ST型别以ST54、ST39、ST26为主；3.RAPD分型方法用于艰难梭菌分子流行病学分析也具有较高的分辨率；4.某院ICU患者HOHA CDAD发病率较高；5.CDAD与AAD中非CDAD患者相比具有明显的感染因素。