弧菌属细菌是海水鱼、虾、贝类的一种常见致病菌,由其引发的养殖病害每年为国家造成极大的经济损失。同时,弧菌属细菌中的一些种群也是引起人类急性肠胃炎的主要病原生物,它们可在人群中引起暴发性食物中毒,造成散发性米泔样腹泻和痢疾等中毒症状。因此,检测海洋环境中病原弧菌对于保障人体健康和促进海水养殖业健康发展等都有着重要的意义。然而,目前检测病原弧菌的技术存在方法繁琐、耗时很长、集成度低等缺点,无法满足海洋监测的需要,因此亟需研发快速、简便、灵敏、集成度高的检测技术。?免疫磁珠(Immonumagnetic beads,IMB)分离技术是近年来国内外研究较多的一种新的免疫学技术,它具备了固相化试剂特有的优点以及免疫学反应的高度专一性等特点。本研究就是应用这种技术—免疫磁珠技术对病原性海洋弧菌进行快速检测,通过实验对检测过程中出现的各种理化因子进行优化,从而建立起实用、简便、准确的病原性海洋弧菌免疫磁珠快速检测体系。结果如下:1.本实验过程中通过耳缘静脉注射对新西兰大白兔进行免疫总共获得效价达到1:5120的兔抗鳗弧菌免疫血清210ml、1:5120的兔抗溶藻弧菌免疫血清150ml、1:2560的兔抗河流弧菌免疫血清230ml、1:2560的兔抗溶藻弧菌免疫血清190ml。为后续试验研究提供了大量高效价的免疫血清。2.通过免疫磁珠分离技术纯化实验室制备的兔抗血清中的IgG,并与A蛋白亲和层析法比较得出:抗体包被磁珠在10min就可以达到饱和,即100μL磁珠可以结合22.7μg IgG。两种方法得到IgG纯度都很高,经过SDS-PAGE电泳都只得到25KD和55KD左右的两条带;免疫磁珠分离法与A蛋白亲和层析法与以往的其他分离纯化方法相比具有反应时间短、操作简便、所得抗体纯度高、得率高等特点。其中免疫磁珠分离法得到的抗体ELISA效价(1:307200)高于A蛋白亲和层析法(1:256000);免疫磁珠分离法反应所需时间(10min)远小于A蛋白亲和层析法所需的20min,其得率(11.5mg/ml)也高于A蛋白亲和层析法的10.25mg/ml。3.初步建立了鳗弧菌检测的免疫磁珠技术,即:抗体包被磁珠的最佳浓度为40μg/ml,最佳反映时间为10min,包被好的磁珠与菌液最佳反映时间为20min。经测定免疫磁珠检测鳗弧菌的灵敏度高达0.13 CFU/ml。