论文部分内容阅读
植物病毒是导致粮食、油料、蔬菜、果树、花卉产量下降和品质变劣的重要原因,番茄和辣椒是我国重要的蔬菜作物,在生产上严重遭受植物病毒病的侵害,造成生产上的损害。随着植物翻译起始因子的深入研究,植物抗病毒研究将面临新的课题。病毒侵染寄主植物并在植物体内进行自我复制和增殖需要借助寄主自身蛋白质合成机制。研究发现真核翻译起始因子4E在植物抗病毒中起作用,番茄和辣椒中eIF4E和eIF(iso)4E的基因都对马铃薯Y病毒属病毒有抗性。通过植物基因工程途径,干扰病毒利用植物mRNA翻译蛋白质的过程,可抑制病毒在寄主植物内的复制和增殖,不仅可获得抗病毒植物材料,而且可加深对植物-病毒互作分子机理的认识。本研究通过克隆真核翻译起始因子4E相关基因,利用基因失活和正义表达顺式调控植物自身eIF4E和eIF(iso)4E表达,提高植物对病毒的抗性,探讨真核翻译起始因子4E相关基因介导的抗病毒特性的作用机理。1.从番茄品种“中蔬五号”中克隆了真核翻译起始因子4E编码基因。分析表明,番茄eIF4E基因全长cDNA长696bp,该克隆片段含有长687bp的开放读码框,编码228个氨基酸,与报导的AY723735核酸序列同源性为98%,氨基酸序列同源性为100%。2.构建了番茄eIF4E正义表达载体及番茄eIF4E反义抑制表达载体。3.以番茄品种“中蔬五号”为受体,通过农杆菌介导的方法用番茄eIF4E正义载体进行遗传转化,获得番茄正义表达载体卡那霉素抗性植株13株,番茄eIF4E反义抑制表达载体卡那霉素抗性植株4株。4.从辣椒品种“苏椒5号”中克隆辣椒的真核翻译起始因子4E编码基因。经分析表明,辣椒eIF4E基因全长cDNA长875bp,克隆片段含有长687bp的开放读码框,编码228个氨基酸,与报导的AF521963核酸序列同源性为100%,氨基酸序列同源性为100%。5.构建了辣椒eIF4E正义表达载体及辣椒eIF4E反义抑制表达载体。6.从番茄品种“中蔬五号”中克隆了番茄eIF(iso)4E编码基因。番茄eIF(iso)4E基因全长cDNA长840bp,克隆片段含有长603bp的开放读码框,编码200个氨基酸,与报导的BT014561核酸序列同源性为99%,氨基酸序列同源性为100%。7.构建了番茄eIF(iso)4E正义表达载体及番茄eIF(iso)4E反义抑制表达载体。8.以番茄品种“中蔬五号”为受体,通过农杆菌介导的方法用番茄eIF(iso)4E正义表达载体和番茄eIF(iso)4E反义抑制载体进行遗传转化,获得番茄eIF(iso)4E正义表达载体卡那霉素抗性植株5株。获得番茄eIF(iso)4E反义抑制表达载体卡那霉素抗性植株3株。9.从辣椒品种“苏椒5号”中克隆辣椒的eIF(iso)4E编码基因。分析表明,辣椒eIF(iso)4E基因全长cDNA长856bp,克隆片段含有长609bp的开放读码框,编码202个氨基酸,与TC5256核酸序列同源性为99%,氨基酸序列同源性为100%。