壳聚糖导管结合雪旺细胞和神经片段修复周围神经缺损的实验研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:gutj
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目的:通过分离大鼠正常神经组织的雪旺细胞,观察在体外培养传代的生长状况,探讨可供神经组织工程研究和临床细胞治疗应用的细胞基础,并实验研究雪旺细胞、神经片段结合神经导管治疗神经缺损,与自体神经移植、单纯导管治疗进行对比,通过记录体内移植后损伤坐骨神经的形态学、神经电生理、功能恢复等指标,为周围神经损伤修复与重建的解决途径提供实验依据。方法:第一部分实验选取10只健康雌性Wistar大鼠,麻醉后切取右下肢坐骨神经段10mm。以消化培养法为主,结合差速贴壁法来培养较纯净的雪旺细胞。通过光镜、蛋白免疫组化观察雪旺细胞的形态学变化,进行鉴定及绘制生长曲线。通过与神经导管的共培养与神经导管结合。第二部分实验在第一部分实验的基础上,32只成年Wistar大鼠随机分为A、B、C、D4组,分别用神经自体移植、与雪旺细胞结合的神经导管、含有神经片段的神经导管和单纯导管移植桥接Wistar大鼠10mm神经缺损,观察体内移植后1周、3周、7周、10周、13周形态学、功能恢复等指标,大鼠坐骨神经缺损后13周做电生理检测,包括:坐骨神经传导速度(NCV)、神经-肌肉复合动作电位振幅(AMP)。甲苯胺蓝染色组织学观察再生神经中段髓鞘化轴突密度和髓鞘面积。全部数据采用SPSS 14.0软件包进行统计分析和处理,参数检验方法采用方差分析,两组数据间的比较采用q检验。结果:以消化培养法为主,结合差速贴壁法培养出雪旺细胞纯度在85%以上,数量在9-11×105个/mL,能够满足下一步动物实验所需移植的需求,提供神经修复研究的细胞基础。与雪旺细胞结合的神经导管、含有神经片段的神经导管组大鼠移植侧肢体活动良好,足迹实验、电生理检测、再生神经中段检查髓鞘化轴突密度和髓鞘面积与单纯导管移植组比较有显著性差异(P<0.05),各项指标接近自体移植组(P>0.05),雪旺细胞结合的神经导管组与含有神经片段的神经导管组各项参数无显著性差异(P>0.05)。结论:综合消化培养法和差速贴壁法能够加快雪旺细胞的分离纯化时间,提高细胞分离的纯度。种植雪旺细胞的神经导管和含有神经片段的神经导管组织工程移植体桥接神经缺损有促进神经轴突再生与神经功能恢复的良好作用,效果优于单纯神经导管移植。种植雪旺细胞的神经导管和含有神经片段的神经导管组织工程移植体桥接神经缺损尚不能完全达到自体神经移植的疗效。
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