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猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2, PCV2)是圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)成员,是目前哺乳动物中发现的最小的无囊膜、单链环状DNA病毒。PCV2被认为是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome, PWMS)等PCV2相关性系统疾病(PCV2-associated disease, PCV2-AD)的主要病原体。PCV2呈现全球性分布,能损伤猪的免疫系统,引起猪严重的免疫抑制,同时临床上PCV2与其他病原体(如猪瘟病毒、猪蓝耳病毒等)多重感染和混合感染常常发生,给养猪业造成重大经济损失。病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)因与病毒结构相似、且不含有病毒基因组成分,具有很好的免疫原性和生物安全性,已逐渐成为病毒组装和入侵细胞机制、候选疫苗研究与开发的热点。本研究旨在利用原核表达系统制备PCV2 VLPs,并对PCV2 VLPs在长期保存中的稳定性进行初步研究。本研究首先人工合成并优化PCV2b/1B亚型(GenBank登录号：KF700357)衣壳蛋白(Capsid protein, Cap)基因,构建其表达载体pET100-FL,利用大肠杆菌表达系统(BL21)成功表达Cap蛋白,经Ni柱纯化得到较为纯净的蛋白,通过SDS-PAGE蛋白电泳和Western blot验证纯化所得的蛋白质为PCV2 Cap蛋白。然后在体外选择缓冲液等组装条件将纯化所得PCV2 Cap蛋白进行VLPs组装。通过透射电镜(Transmission electron microscopy, TEM)观察发现PCV2 Cap蛋白形成了约17nmVLPs,其形态结构与野生PCV2相似。通过间接免疫荧光(Indirect immunofluorescent assay, IFA)和间接ELISA试验揭示PCV2 VLPs具有入侵PK15细胞的能力,能够识别PCV2阳性血清。最后探索不同缓冲液、NaCI浓度以及不同温度对PCV2 VLPs稳定性的影响。利用TEM观测PCV2 VLPs直径和形态,TEM结果与动态光散射(Dynamic light scattering, DLS)所检测PCV2 VLPs直径大小一致。TEM和间接ELISA结果显示PCV2 VLPs在含有0.5 M NaCl的buffer A中4℃条件下,保存7个月后仍能保持稳定的形态和体外抗原性。本研究所形成的结果为PCV2的组装和入侵细胞机理研究提供了一个简单、有效的分子模型,也为临床上PCV2中和抗体的血清学检测、PCV2病毒样颗粒疫苗制备奠定了可行性试验基础。