伴随我国经济快速发展,现代社会女性的生存压力不断增大,在环境污染、饮食习惯及生育方式等多种外源因素的影响下,近年来我国乳腺癌发病率表现为逐年递增的趋势,乳腺癌已成为我国第六位肿瘤致死性诱因。尽管介入治疗、分子靶向治疗等新型综合治疗模式可延长乳腺癌患者的生存期,但在临床研究中发现乳腺癌患者预后与肿瘤分期及治疗介入时间密切相关,实现乳腺癌的早期确诊、早期治疗可有效提高患者五年生存率,因此提高乳腺癌早期诊断率成为改善乳腺癌患者预后,降低死亡率的关键因素。随着肿瘤细胞特异性、疾病特殊性及患者个体差异与生物标志物相关性的明确,生物标志物在肿瘤的早期诊断、预后判断及治疗方案选择等方面作用日渐凸显。可靠的肿瘤标志物不仅能有效区分同类型肿瘤患者病情进展的严重程度,还能提供准确的临床特征,有利于患者预后评估,更重要的是肿瘤标志物作为个体化治疗的基础可用于指导治疗方案的选择。因此筛选可靠的乳腺癌生物标志物,建立无创高通量评价方法辅助临床病理指标,提高早期确诊率,实现乳腺癌的早发现、早诊断、早治疗,是乳腺癌防治的重要策略之一。乳腺癌的发生发展需在多个因素共同影响下渐进实现,其进展过程经历了正常上皮细胞、上皮细胞增生、上皮细胞非典型性增生、原位癌、浸润性癌等阶段,因此上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions, EMT)是上皮来源肿瘤细胞演进、浸润及转移的基础。EMT程序启动的核心事件是E-cadherin表达的改变,其表达的下调可使肿瘤细胞黏附功能下降,促使上皮来源肿瘤细胞顺利实现浸润及转移。临床研究证实E-cadherin与卵巢癌、肝癌、胃癌、肺癌的病理分级及临床TNM分期等呈负相关性,提示其可作为生物学标志物用于肿瘤诊断和病情评价。sE-cadherin作为E-cadherin胞外水解片段,肿瘤细胞中E-cadherin代谢的加快可使肿瘤患者血清中sE-cadherin含量明显增加。与E-cadherin抑癌作用不同,sE-cadherin可通过破坏细胞间黏附作用、刺激MMPs和ADAM表达,活化细胞表面受体如EGFR、IGF-1R等途径促进肿瘤细胞的增殖、迁移和分化。研究证实sE-cadherin在肿瘤的早期诊断、病情进展及预后评估领域有着重要作用,且与传统的穿刺活检诊断方法相比,sE-cadherin可稳定存在于癌症患者的血清及尿液中,方便取材,但目前关于sE-cadherin在乳腺癌诊断中的应用尚属空白,因此本研究中我们对乳腺癌患者病灶组织E-cadherin表达水平及血清中sE-cadherin含量进行了测定,分析E-cadherin和sE-cadherin水平与乳腺癌患者临床病理特征相关性,同时探讨E-cadherin和sE-cadherin与乳腺癌预后DFS和OS的关联性,旨在为乳腺癌的临床诊断、预后评估及治疗提供新的参考依据。目的1.分析乳腺癌组织、癌旁正常组织及乳腺增生组织中E-cadherin表达水平,明确其在不同组织中的表达差异性。探讨乳腺癌患者组织中E-cadherin表达水平与乳腺癌患者临床病理特征及无疾病生存时间和总生存时间的相关性。2.明确乳腺癌患者血清中sE-cadherin水平与正常女性人群的差异性,分析其与乳腺癌患者临床病理特征的相关性,明确其与无疾病生存时间和总生存时间关系,探讨sE-cadherin用于乳腺癌辅助诊断、病情评价及预后评估的可行性。方法1.选取2007-2013年间,在烟台市烟台山医院乳腺外科接受诊断及治疗女性患者病例,病理学确诊后收集良性乳腺病变或乳腺癌患者标本共130例,分为对照组(A组)、良性组(B组)和恶变组(C组),对照组取乳腺癌周边健康乳腺组织(30例),采集时样本与癌组织距离不得小于5 cm；良性组为乳腺增生组织(30例)；恶变组为乳腺癌组织(70例)。详细收集患者临床资料包括患者年龄、肿瘤大小、组织病理分级、分化程度、淋巴结转移情况、临床TNM分期、病理类型及预后情况等信息。积极对患者进行随访,记录患者无病生存时间(disease free survival, DFS)和总生存时间(overall survival,OS)。免疫组化法分析乳腺癌组织、癌旁正常组织及乳腺增生组织中E-cadherin表达及分布,RT-PCR和Western-blot测定E-cadherin mRNA及蛋白表达水平,x2检验分析E-cadherin表达水平与乳腺癌患者临床特征指标的相关性。2.选取2007-2013年间,在烟台市烟台山医院乳腺外科接受诊断及治疗女性乳腺癌患者111例,详细记录患者临床资料包括患者年龄、肿瘤大小、组织病理分级、分化程度、淋巴结转移情况、临床TNM分期、病理类型及预后情况等信息。积极对患者进行随访,记录患者无疾病生存时间(disease free survival, DFS)和总生存时间(overall survival, OS)。收集同时期健康女性人群55例,设为对照组。收集血清后酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)测定血清中sE-cadherin,x2检验分析其与临床病理特征、无疾病生存时间和总生存时间相关性。结果1. E-cadherin蛋白阳性表达呈棕黄色染色,主要分布于细胞膜及细胞连接处。70例乳腺癌患者组织样本中可见36例E-cadherin阴性表达,阳性率为48.6%；30例乳腺癌旁正常组织样本仅见1例E-cadherin阴性表达,阳性率为96.7%；30例乳腺癌增生组织样本中有6例E-cadherin阴性表达,阳性率为80.0%。乳腺癌组织中E-cadherin阳性率明显低于正常及增生组织组(P<0.05),癌旁正常组织内E-cadherin阳性率与增生组无显著差异。2.伴随疾病进展,E-cadherin蛋白及mRNA表达水平逐渐减低(P<0.05),某些乳腺癌患者样本甚至出现E-cadherin表达缺失,这与免疫组化结果相一致。3. E-cadherin表达与淋巴结转移、组织病理分级、临床TNM分期、复发及转移情况相关；Spearman秩相关分析进一步证实E-cadherin表达水平与有无淋巴结转移呈负相关性(R=-0.252,P=0.037),与组织病理分级呈负相关(R=-0.382,P=0.013),与临床TNM分期呈负相关(R=-0.357,P=0.021)。4. E-cadherin阳性表达患者有更好的无疾病生存时间及总生存时间,提示E-cadherin表达水平与乳腺癌预后相关。5. ELISA法测定乳腺癌患者血清中sE-cadherin含量为2218.9±319.6 ng/ml,明显高于对照组(p<0.001)。利用ROC曲线分析以探讨sE-cadherin用于乳腺癌诊断的有效性,可见sE-cadherin对应的ROC曲线下面积(Area Under Curve, AUC)为0.935,其95%的近似置信参考区间为(0.900-0.969),其ROC曲线对应的最佳诊断分界点(cut-off point)为1246.7 ng/ml,此时敏感性为79.1%,特异性为89.3%。6.x2检验证实sE-cadherin含量与临床TNM分期、肿瘤大小、病理组织分级、有无淋巴结转移密切相关(P<0.05),与年龄、病理类型、ER、PR及HER2阳性表达无相关性。7. sE-cadherin高表达患者DFS和OS低于sE-cadherin低表达患者(36.8%vs.67.8%, P=0.002; 55.4% vs.81.4%, P=0.032),提示患者血清中sE-cadherin含量越低其治疗后DFS和OS越长,其复发转移的可能性越低。8.应用Cox比例风险模型分析乳腺癌DFS影响因素,显示年龄、肿瘤大小、TNM分期、病理分型、ER/PR/HER2表达水平不是DFS的独立影响因素；组织病理分级(HR=3.19,95% CI=2.13-10.02, P=0.003)、淋巴结转移(HR=4.12, 95% CI=1.98-15.21, P=0.007)及血清sE-cadherin含量(HR=3.38,95% CI=2.47-11.89, P=0.009)为乳腺癌患者预后DFS的独立影响因素。9.应用Cox比例风险模型分析乳腺癌OS影响因素证实TNM分期(HR=3.31, 95% CI=1.38-7.29, P=0.02)、淋巴结转移(HR=2.98,95% CI=1.86-10.02, P=0.012)及血清sE-cadherin含量(HR=2.97,95% CI=1.28-9.11, P=0.017)为乳腺癌患者预后OS的独立影响因素；年龄、肿瘤大小、组织病理分级、病理分型、ER/PR/HER2表达水平不是OS的独立影响因素。结论(1)乳腺癌组织E-cadherin表达阳性率明显低于癌旁正常组织及增生组织,其表达与乳腺癌患者的淋巴结转移、组织病理分级、临床TNM分期、复发及转移情况均呈负相关性;E-cadherin阳性表达患者有更好的无疾病生存时间及总生存时间,提示E-cadherin表达水平与乳腺癌预后相关。(2) sE-cadherin含量在乳腺癌患者及正常人群中存在明显差异,且与乳腺癌患者临床TNM分期、肿瘤大小、病理组织分级、有无淋巴结转移相关；sE-cadherin与乳腺癌的预后相关,sE-cadherin高表达患者总生存时间及无病生存时间低于sE-cadherin低表达患者,即血清中sE-cadherin含量越高,患者预后也相对较差,低含量患者预后相对较好。(3)组织病理分级、淋巴结转移及血清sE-cadherin含量为乳腺癌患者预后DFS的独立影响因素。TNM分期、淋巴结转移及血清sE-cadherin含量为乳腺癌患者预后OS的独立影响因素。